结直肠癌是西方国家同时也是我国发病率较高的恶性肿瘤。遗传及表观遗传变异的累积导致了结直肠癌的发生，其中最为常见的遗传改变为KRAS、BRAF和PIK3CA的基因突变。在西方结直肠癌患者中，它们的突变频率已明确，对于它们与临床病理特征及预后的相关性也有深入研究。其中KRAS的基因型被认为可指导患者对靶向药物的使用，BRAF的突变提示患者预后不良，而这些提示意义在中国结直肠癌患者中尚未明确。同时在西方患者的研究中发现携带20号染色体长臂(20q)显著扩增但无上述基因突变的患者发生肝转移率(61％)要明显高于其他患者，提示联合检测基因突变和20q可以预测肝转移。　　本研究拟在中国结直肠癌患者中，明确基因突变及20q扩增的状况，探讨它们与临床病理特征、预后及肝转移的相关性，为实现中国结直肠癌患者的个体化治疗及肝转移早期诊断提供重要的理论依据。　　第一部分采用队列研究，旨在明确中国结直肠癌患者中KRAS、BRAF和PIK3CA的基因突变频率及其与临床病理特征及预后间的相关性。我们在东南大学附属中大医院2007年-2012年实施结直肠癌原发灶切除术的患者中收集了214例患者的肿瘤标本，所有患者均有完整的临床病理及预后资料（患者中位随访时间为34个月）。所有标本均通过中性甲醛固定、石蜡包埋、切片，HE染色后由病理医师复阅切片确定肿瘤细胞≥50％区域后进行切割富集肿瘤细胞提取DNA。我们采用PCR-直接测序的方法检测了KRAS基因的2外显子、BRAF基因的15号外显子和PIK3CA基因的9号和20号外显子。采用x2检验（Fishers精确概率法）、t检验及秩和检验分析上述三个基因的基因型与患者临床病理特征间的关系。Kaplan-Meier检验用于生存分析，Log-rank检验用于比较两组间生存状况，并用多因素COX回归分析进行多因素分析。所有统计学分析均使用SPSS18.0完成，主要结果如下:　　①结直肠癌患者中KRAS，BRAF和PIK3 CA的突变频率依次为44.9％(96/214)，4.2％(9/214)和12.26％(26/212)。这三个基因中最常见的三种突变为G12D，V600E和H1047R;②绝大多数BRAF和PIK3CA突变均发生在结肠癌患者中，且BRAF突变出现在右半结肠中;③BRAF600位密码子的突变与结肠癌患者的高TNM分期(p＜0.001)和总体生存下降相关(p＜0.000)，并能作为提示患者预后不良的独立指标(HR=4.154，p=0.004));④与KRAS wt/BRAF wt患者(N=205)相比，KRAS13位密码子(N=25)突变与总体生存下降相关(p=0.016)，并能作为提示患者预后不良的独立指标(HR=2.681，p=0.011)，而KRAS12位密码子突变没有该提示作用，并且在KRAS13位密码子突变中，c.38G＞A(p.G13D，N=23;HR=2.648，p=0.016)最能显示出与患者预后不良的相关性。　　第二部分主要采用病例-对照研究，探索20q扩增的状况与结直肠癌患者临床病理特征、预后及肝转移的相关性。我们在东南大学附属中大医院2007-2012实施结直肠癌手术的患者中收集了46例患者的肿瘤标本，其中39例未发生远处转移，7例发生了肝转移。综合全基因组的分析数据（包括aCGH和SNP），我们设计了3个对应于20q染色体的BAC克隆探针作为实验探针及1个位于20p的参照探针，并成功应用了iFISH(间期荧光原位杂交)技术直接观测原发灶肿瘤细胞中20q的扩增状态。该技术在国内结直肠癌石蜡组织中尚未开展。采用x2检验(Fishers精确概率法)、t检验及秩和检验分析探针之间、20q扩增状态与患者临床病理特征及预后转移间的关系。Kaplan-Meier检验用于生存分析，Log-rank检验用于比较两组间生存状况。所有统计学分析均使用SPSS18.0完成，主要结果如下:　　①肿瘤组织中普遍存在20号染色体的不稳定，这3个探针对应的20q的DNA片段在结直肠癌患者的肿瘤腺体细胞中均有扩增;②由于3个探针分散在20号染色体的长臂，其对应的DNA片段间没有显示扩增差异，提示扩增区域是跨越20q12到20qter整个片段的扩增;③我们尚未发现20q的扩增状态与患者临床病理特征、预后及转移间存在统计学相关性。目前的相关性分析结果在很大程度上受到了样本量的限制，在今后的实验中将扩大样本量，尤其是肝转移组。　　综上所述，我们的研究表明PI3K/RAS-RAF信号通路的基因突变在中国结直肠癌患者中普遍存在，但具有一些与西方患者不同的特点。在目前我们所搜集的患者中，我们证实了BRAF600位密码子的突变可作为中国结肠癌患者预后不良的独立指标;并首次证实在排除BRAF突变的干扰后，KRAS13位密码子突变(尤指p.G38D)可以作为中国结直肠癌患者预后不良的独立指标。此外，我们证实中国结直肠癌患者普遍存在20号染色体的不稳定，在患者肿瘤腺体细胞中20q12-qter的拷贝数目均明显高于正常腺体。我们的结果表明一种特定的突变能够代表一种特定的生物学效应和临床提示，强调了关注结直肠癌患者的分子生物学特征对于实现肿瘤患者个性化治疗的重要意义。