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整合子是近年来在细菌中发现的一种可移动性基因元件,通过特异性位点重组捕获并表达外源性基因盒,是导致耐药基因在细菌间水平传播的重要原因。目前国内人医临床对该耐药机制己逐步深入研究,而在兽医临床上的报道尚少。抗生素在养殖业上的滥用造成一种选择性压力,促进了整合子-基因盒在细菌中出现和扩散。本研究拟调查整合子-基因盒在广东省兽医临床大肠杆菌中的流行情况,并对整合子与质粒介导喹诺酮耐药机制的相关性进行了初步的探讨,以期为指导养殖场临床合理用药、新药研发以及控制耐药基因在细菌间传播提供依据。
1.细菌药物敏感性检测
对广东集约化猪场两年采集的大肠杆菌进行临床常用抗菌药物的耐药情况普查。随机选取不同栏舍的仔猪样品96份、母猪样品190份和环境水样品40份共分离鉴定326株大肠杆菌,进行临床常用12种抗菌药物的敏感性试验测定。检测发现各种抗菌药物的耐药率分别为:环丙沙星(51.5%),恩诺沙星(53.1%),阿米卡星(58.9%),庆大霉素(69.3%),氟苯尼考(62.3%),头孢噻呋(73.3%),氨苄西林(75.5%),氯霉素(74.8%),四环素(81.9%),多西环素(82.5%),磺胺二甲嘧啶(91.4%),甲氧苄啶(97.2%)。研究结果显示,检测的大肠杆菌对抗菌药物呈现不同程度的耐药,并且呈现多重耐药,以9耐,10耐,11耐居多,分别占19.2%,17.8%,16.6%。
2.大肠杆菌整合子和基因盒的调查
326株大肠杆菌通过PCR扩增、酶切鉴定、克隆转化和测序分析检测I、II、III型整合子的携带情况,并采用了脉冲场凝胶电泳(PFGE)对整合子阳性菌株进行分型。结果显示,326株大肠杆菌中有120(36.8%)株携带I型整合子,其中有40株携带基因盒;6(1.84%)株携带II型整合子,其中2株携带基因盒。1株同时携带I、II型整合子。所检测的基因盒有1Kb,1.7Kb,1.9Kb,2Kb,1Kb+2Kb共5种组合,其中21株仅携带1个基因盒,18株携带两个基因盒,3株携带3个基因盒。没有检测到III型整合子。广东集约化猪场整合子基因的流行比较普遍,且以I型整合子为主。42株携带基因盒的整合子阳性大肠杆菌全部能进行PFGE分型,不同年份、动物个体、养殖场环境存在着耐药大肠杆菌的克隆传播。
3.整合子阳性菌的PMQR基因研究
采用PCR检测方法,对126株整合子阳性大肠杆菌检测PMQR基因(qnrA,qnrB,qnrS,aac(6)-Ib-cr和qepA)。结果:检测出qnrA1株,qnrB10株,qnrS74株,aac(6)-Ib-cr30株,未检出qepA。研究结果表明广东集约化猪场PMQR基因在整合子阳性菌中比较流行,且以qnrS为主。