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背景与目的：全世界哮喘发病率逐渐增加,我国哮喘患者也逐年上升,因此研究哮喘发病机制并寻求有效而副作用小的药物成为研究热点。内质网应激(ERS)是真核细胞的一种保护性应激反应,病毒感染,氧化应激、缺血缺氧、营养不足和钙失衡等均可引起ERS,因此ERS参与多种疾病的病理和生理过程,包括肝功能损伤,神经退行性病变,循环系统疾病,肿瘤的发生和发展等。ERS以多种机制作用于炎症反应通路,与机体的炎症反应密切相关,所以ERS也参与了很多炎症性疾病,呼吸系统疾病中有较多关于ERS与慢阻肺的关系报道,但ERS与哮喘关系的研究报道国内甚少,而哮喘本质是气道慢性炎症,故推测ERS也参与了哮喘的发病。哮喘治疗目前临床上主要应用激素及支气管扩张药等,但长期应用可带来较多副作用,对儿童生长发育也有一定影响。谷氨酰胺是体内非必需氨基酸,主要用做胃粘膜保护剂治疗慢性胃炎,溃疡等,但也有很多学者研究发现谷氨酰胺有抗炎,调节免疫,保护粘膜屏障等作用,而哮喘发病与T细胞免疫功能异常有关,而且以慢性气道炎症为其特点,推测谷氨酰胺可应用于哮喘的治疗。本论文主要探讨哮喘小鼠模型中内质网应激变化及炎症因子的改变,并应用谷氨酰胺干预后观察了谷氨酰胺对哮喘的治疗作用及其可能的作用机制。方法：1.6-8周龄BALB/C小鼠,以卵蛋白及氢氧化铝致敏后雾化吸入卵蛋白激发气道制备哮喘小鼠模型。小鼠随机分成5组,每组各10只。A正常对照组；B哮喘模型组；C低剂量谷氨酰胺治疗组：0.4g/kg；D中剂量谷氨酰胺治疗组：0.75g/kg；E大剂量谷氨酰胺治疗组：1.5g/kg。2.取各组小鼠血清用ELISA法测定IL-6,IL-4,IgE,TNF α,IL-12水平；3.取各组小鼠BALF离心后的细胞涂片进行Diff-quik染色,检测白细胞数及嗜酸细胞数；4.取各组小鼠BALF上清液用ELISA法测定IL-6,IL-4。5.小鼠一侧肺组织甲醛固定后进行HE染色观察肺部炎症改变。6.另一侧肺用Western Blot方法检测肺组织JNK,pJNK,CHOP,GRP78IRE-1,BAX,Bcl2,Caspase12表达.7.利用衣霉素制备细胞ERS模型：体外培养人肺腺癌细胞株A549细胞,用MTT法检测不同浓度(0.1ug/ml,1ug/ml,10ug/ml)衣霉素对A549细胞作用不同时间(6,12,24,48h)的细胞增值抑制率,选定应用衣霉素合适浓度及时间。8.MTT法检测不同浓度谷氨酰胺(2,4,8,12,16mmol/1)对产生内质网应激反应的A549细胞的作用不同时间点(12,24,48小时)的细胞增殖抑制率,选定应用谷氨酰胺的合适浓度及时间。9.细胞培养分5组,空白对照组：在培养液中只有A549细胞及；衣霉素组：培养液中加入A549细胞及衣霉素1ug/ml:不同浓度谷氨酰胺组,分3组：GLN4组：培养液中加入A549细胞,衣霉素lug/ml以及4mMmmol/1谷氨酰胺；GLN8组：培养液中加入A549细胞,衣霉素1ug/ml及8mmol/1谷氨酰胺；GLN12组：培养液中加入A549细胞,衣霉素lug/ml及12mmol/1谷氨酰胺。Western Blot方法检测不同细胞组培养12小时后的JNNK,pJNK.CHOP,GPR78表达水平。结果：1.B组(模型组)血清IL-6,IL-4,IgE,TNF α水平较A组(对照组)明显升高,IL-12水平明显降低,差异有显著性(P<0.05)。C,D,E,组血清IL-6,IL-4,IgE,TNF α较B组明显降低,IL-12水平明显升高,有统计学意义(P<0.05)。2.Diff-quik染色结果：B组(模型组)肺泡灌洗液中白细胞数及嗜酸细胞计数明显高于A组(正常组)差异有显著性(p<0.05)；C,D,E组肺泡灌洗液中白细胞数及嗜酸细胞数较模型组明显减少,但高于正常组,差异有显著性(P<0.05)；3.B组(模型组)肺泡灌洗液中工L-6,IL-4水平较A组(对照组)明显升高,差异有显著性(P<0.05)。C,D,E组肺泡灌洗液中IL-6,IL-4较B组明显降低,有统计学意义(P<0.05)。4.肺组织病理结果：HE染色结果,B组与A组比较,支气管及血管周围大量淋巴细胞和嗜酸性粒细胞等炎性细胞浸润；支气管上皮细胞多处脱落,基底膜可见轻度增厚,支气管平滑肌有增生表现,细小的支气管内可见到较多粘液栓和炎性渗出物,肺间质和肺泡腔内也可见炎性细胞浸润；C.D.E组较模型组比较,支气管及血管周围,肺间质炎性细胞浸润明显减轻,支气管上皮脱落减少,肺泡腔内炎性细胞减少。5.B组与A组比较,小鼠肺组织pJNK.CHOP,GPR78,IRE1表达水平明显升高,而JNK表达无明显差异,说明哮喘发病时肺部发生了内质网应激反应。谷氨酰胺治疗组的pJNK.CHOP,GPR78,IRE1表达水平较模型组明显降低,差异有显著性,说明谷氨酰胺对内质网应激有保护作用：B组与A组比较,小鼠肺组织BAX/Bcl2,Caspase12表达水平明显升高,谷氨酰胺治疗组其值降低,说明谷氨酰胺通过抑制内质网应激反应抑制了细胞凋亡的发生：6.细胞毒性MTT方法检测结果,衣霉素处理细胞A549浓度为lug/m1,作用时间为12小时时细胞增值抑制率为51.3%,最接近50%,故选择衣霉素作用浓度为lug/ml,作用时间为12h。7.MTT法检测不同浓度谷氨酰胺(2,4,8,12,16mmol/1)对产生内质网应激反应的A549细胞作用不同时间点(12,24,48小时)的细胞增殖抑制率结果为谷氨酰胺8mmol/l作用12小时的细胞增殖抑制率为48.9%,最接近50%,故选择此浓度及时间点为合适作用浓度及时间。8.体外细胞培养试验中,衣霉素组较空白对照组pJNK.CHOP,GPR78表达水平明显升高,而JNK表达无明显差异,说明衣霉素诱导A549细胞产生了内质网应激。谷氨酰胺+衣霉素组的pJNK.CHOP,GPR78表达水平较衣霉素组明显降低,差异有显著性,说明谷氨酰胺对内质网应激有保护作用。结论：1.哮喘时有IL-4, IL-6, IgE, TNFα这些促炎症因子水平增高,血清抑炎因子IL-12水平降低；谷氨酰胺治疗可降低促炎症因子的释放,增加抑炎因子水平,说明谷氨酰胺通过抑制哮喘的炎症反应而起到对哮喘气道损伤的保护作用。2.哮喘时肺组织产生了内质网应激反应,并有细胞凋亡及炎症的发生,谷氨酰胺对内质网应激有保护作用,并进一步抑制了细胞凋亡及气道炎症,从而对哮喘有治疗作用。3.体外细胞培养结果证实,在细胞水平,谷氨酰胺对产生内质网应激的A549细胞有保护作用。