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第一部分MMI-166对人胰腺癌SWI990细胞株增殖凋亡的影响目的研究金属基质蛋白酶抑制剂MMI-166对人胰腺癌SW1990细胞株增殖和凋亡的影响。方法应用不同浓度(25μg/ml/50μg/ml/100μml)的MMI-166处理人胰腺癌SW1990细胞株24、48h。用MTT比色法检测细胞增殖抑制率；利用Annexin V对磷脂酰丝氨酸外翻(细胞凋亡的早期特征)进行检测,用碘化丙啶(propidiumiodide,PI)对凋亡晚期和坏死细胞核进行染色,分别应用荧光显微镜观察细胞凋亡和流式细胞术检测细胞凋亡率。结果1.人胰腺癌SW1990细胞株经不同浓度MMI-166作用后,MTT结果显示细胞生长抑制率随药物浓度的增加而增加；随MMI-166作用时间延长而增加(24小时细胞生长抑制率为34.23+3.87%、4.81+2.01%、53.91+1.74%；48小时细胞抑制率为39.95±1.83%、52.26±3.88%、63.20±2.48%)；2.荧光显微镜下观察显示早期凋亡细胞细胞膜完整,细胞核不被PI染色,只被Annexin V染色呈现绿色荧光；坏死细胞和晚期凋亡细胞细胞膜破损,可同时被AnnexinV和PI染色,呈红、绿双色荧光。3.流式细胞术结果显示,不同浓度MMI-166作用于胰腺癌细胞株SW199024h、48h后,细胞凋亡率分别为(4.17±0.55%、8.22±0.70%、14.10±0.44%)和(11.19±0.47%、23.01±0.53%、28.10±0.52%),实验组显著高于对照组(0.09±0.11%),差异具有统计学意义。结论研究证实人胰腺癌细胞株SW1990细胞增殖可在体外被MMI-166抑制,具体抑制途径可能是通过抑制基质金属蛋白酶活性达到；MMI-166可促进人胰腺癌细胞株SW1990细胞凋亡,MMI-166作用浓度越大及作用的时间越长则细胞凋亡数目越多。第二部分MMI-166对裸鼠胰腺癌移植瘤的作用目的观察基质金属蛋白酶抑制剂MMI-166对裸鼠人胰腺癌细胞SW1990移植瘤生长及移植瘤内金属基质蛋白酶-2、金属基质蛋白酶-9(MMP-2、MMP-9)表达和移植瘤细胞凋亡的影响。方法应用人胰腺癌细胞株SW1990建立BALB/c裸鼠胰腺癌皮下移植瘤模型,并将裸鼠随机分为对照组和实验组。对照组单纯口服生理盐水,实验组口服金属机制蛋白酶抑制剂MI-166(剂量按200mg/kg/天)。实验时间结束后游标卡尺测量肿瘤的长、短径,比较两组间肿瘤体积,公式法计算抑瘤率；应用免疫组织化学法测定肿瘤组织内会属基质蛋白酶-2、会属基质蛋白酶-9(MMP-2、MMP-9)的表达；TUNEL (terminal dexynucleotidyl transferase(TdT)-mediated dUTP nick end labeling)法检测细胞凋亡指数(AI)。结果经MMI-166处理的实验组移植瘤肿瘤体积平均为(1252.30±464.84mm3),明显小于对照组(单纯口服生理盐水)移植瘤肿瘤体积(2241.82±208.06mm3),其瘤体重为(1.42±0.146g)低于对照组(2.17±0.197g),抑瘤率为34.47%。实验组内MMP-2和MMP-9的表达分别为(2.8±1.095)、(2.6±1.517),较对照组显著降低；细胞凋亡指数(AI)实验组(75.6±9.710)%显著高于对照组(17.4±10.139)%。结论实验研究发现腺癌裸鼠移植瘤模型中MMP-2、MMP-9受MMI-166抑制,MMI-166问接抑制裸鼠胰腺癌移植瘤在裸鼠体内生长；裸鼠移植瘤组织内MMP-2、MMP-9可抑制肿瘤组织的凋亡,促进肿瘤细胞生长转移。第三部分MMI-166对人胰腺癌SW1990细胞凋亡相关蛋白表达的影响目的探讨金属基质蛋白酶抑制剂MMI-166促进人胰腺癌SW1990细胞凋亡的机制。方法应用人胰腺癌细胞株SW1990构建BALB/c裸鼠胰腺癌皮下移植瘤模型,并将裸鼠随机分为对照组和实验组,分别给予口服生理盐水和MMI-166(剂量按200mg/kg/天)处理。利用TUNEL (terminal dexynucleotidyl transferase(TdT)-mediated dUTP nick end labeling)法检测细胞凋亡指数(AI)；采用免疫组化法检测细胞凋亡相关蛋白p53、c-myc、bax、bcl-2、survivin、caspase-1、fas等的表达情况；应用不同浓度(0、50、100μg/ml) MMI-166直接作用于人胰腺癌SW1990细胞株24h后,蛋白质印迹法(Western Blot)检测两组间表达有差异的凋亡相关蛋白。结果AI在对照组为(21.3±2.214),显著低于实验组(81.1±7.852)。免疫组化检测提示7种凋亡相关蛋白中实验组内c-myc、survivin的表达积分光密度(IOD值)分别为(7714.516±2228.915)、(4594.058±1239.530),低于对照组,两者差异具有统计学意义(P<0.01)。Western Blot检测发现不同浓度(0、50、100μg/ml) MMI-166作用的人胰腺癌SW1990细胞中,c-myc的表达量分别为(0.169±0.007)、(0.098±0.003)、(0.073±0.008),每两组间比较P<0.05,差异有统计学意义；survivin的表达量分别为(0.391±0.006)、(0.395±0.006)、(0.382±0.004),组间比较P>0.05,差异无统计学意义。结论在MMI-166作用下,MMP-2和MMP-9活性受到抑制,细胞凋亡相关蛋白调整c-myc基因的表达间接下调,凋亡蛋白释放,促进人胰腺癌细胞株SW1990细胞凋亡。