论文部分内容阅读
复方乌梅是一种防治水产动物细菌性疾病的渔用中药复方,主味药是乌梅。复方中含有有苹果酸、柠檬酸、没食子酸和黄酮类等成分,具有抗菌、解毒、收敛止血和祛腐生新的作用。目前,中药复方已广泛应用于水产动物病害的防治,但关于中药复方在水产动物体内的药物代谢过程及其药效作用机理研究尚不明确,因此,对于复方的代谢规律,作用机理研究尤其重要。复方乌梅为体外抑菌效果较强的中药组方。本试验通过复方乌梅超声提取方法及高效液相有效成分含量测定的方法,获得了复方乌梅的最佳提取工艺及同时测定复方乌梅中四种有效成分的含量的高效液相色谱法;通过测定攻毒给药后鲫鱼体内血液生理生化指标的测定,分析了复方乌梅对鲫鱼肝功能及抗氧化机能的影响,研究了复方乌梅在鲫鱼体内的药物代谢过程,及口服药物生物利用度,为认识复方乌梅的代谢规律、在机体内的作用机理,给药途径及剂量提供了宝贵的参考数据。1复方乌梅的药代动力学研究1.1复方乌梅超声提取法的工艺研究采用L9(33)正交试验,以总有机酸、总黄酮为检测指标,建立了复方乌梅超声提取的最佳工艺条件。复方乌梅的最佳提取条件为A2B2C2,即在60℃下加20倍量的水提取3次,每次提取时间为20分钟。试验测得复方乌梅总有机酸与总黄酮含量分别为19.14%和27.56‰。1.2 HPLC测定复方乌梅有效成份含量测定采用HPLC法,以磷酸水溶液(pH 2.55)与乙腈为流动相,采用线性梯度洗脱,0~20 min,5%~15%,检测波长215nm;20~60 min,15%~45%,检测波长280nm;流速为0.6mL/min的色谱条件下各种有效成分不仅能较好的分离,且峰形较好。结果显示:复方乌梅中的苹果酸含量为31.93‰,柠檬酸含量为86.39‰,没食子酸含量为6.60‰,黄芩苷的含量为7.61‰。首次建立了同时测定复方乌梅中四种有效成分含量的方法,为复方乌梅质量控制及其作用机理的研究提供了宝贵的基础数据。试验证实,该法快速简便,稳定可靠,专属性强。1.3复方乌梅在鲫鱼体内的药代动力学研究通过对鲫鱼口灌与注射给药,以没食子酸为目标药物,运用高效液相色谱法(HPLC)检测复方乌梅在鲫鱼血液及肝肾组织中的浓度变化,获得了鲫鱼对复方乌梅的吸收、分布与消除数据。结果表明,复方乌梅在鱼体血液内的药时数据符合开放式一室模型,口灌,静脉注射给药后血液药物代谢动力学方程分别为C=15.1413e-0.07sst,C=21.8244e-0.1732t。口灌组吸收半衰期t1/2Ka与消除半衰期t1/2Ke分别为0.637h,4.001h,最大血药浓度Cmax分别为12.956μg/mL,;注射组消除半衰期t1/2Ka为9.311h,最大血药浓度Cmax12.956μg/mL,22.200μg/mL;药时曲线下面积AUC0-∞分别为105.915 mg/L*h,203.395 mg/L*h。口服复方乌梅没食子酸在体内的绝对生物利用度F=52.074%。口灌组复方乌梅在肝肾内的药时数据符合二室模型,药代动力学方程分别为C=15.9057e-0.2994t+2.4192e-0.0214t,C=13.334e-0.2676t+3.6237e-0.0078t。最大药物浓度Cmax分别为15.222μg/g,16.38μg/g。肝肾消除半衰期t1/2Ka分别为32.440h及99.801h。2复方乌梅药效学研究2.1复方乌梅的体外抑菌效果及急性毒性试验采用药敏试验,进行了复方乌梅体外抑菌试验,采用试管两倍稀释法,测定了复方乌梅超声提取液对鱼类细菌性疾病三种常见致病菌的最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC),及对鲫鱼的急性毒性试验。结果表明,复方乌梅超声提取液对温和气单胞菌(Aeromonas sobria)、迟缓爱德华菌(Edwardsieda torda)和鲁克耶尔森氏菌(Yersina nuckeri j)的最小抑菌浓度分别为3.125mg/ml、0.781mg/ml、0.781mg/ml,最小杀菌浓度分别为12.500mg/ml、3.125mg/ml、1.563mg/ml:复方鸟梅对鲫鱼的48 h半致死浓度为625 mg/kg,安全浓度为62.5mg/kg。2.2复方乌梅药效学研究采用人工体内攻毒的方法,通过测定鲫鱼生理生化指标、抗氧化指标、攻毒死亡率及药物保护率,反应复方乌梅在鲫鱼体内的防治效果。结果表明,复方乌梅能有效的降低血液中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)和总胆红素含量,有保护肝细胞,增强肝功能恢复作用;能有效的清除体内自由基,增加超氧化物歧化酶活力,保护细胞免受伤害,降低体内丙二醛的含量,增加机体抗氧化的能力;能有效的预防并治愈鱼类细菌性疾病,降低患病鲫鱼的死亡率。1%的药饵药物保护率为47.73%。