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目的:建立40个中成药的微生物限度检查方法标准。方法:微生物限度方法学验证中,需氧菌总数计数、霉菌和酵母菌总数计数指标的验证是将试验菌加入到供试品溶液中,充分模拟样品被污染的情况来进行染菌回收比值的考察,需氧菌总数计数项目验证要进行5种试验菌的染菌回收试验,霉菌和酵母菌总数计数要进行2种试验菌的染菌回收试验。染菌回收试验是重点难点,方法的设计遵循由简单到复杂、由单一到联合、可能的情况下尽量减少样品可能被污染的步骤。依次按照平皿常规法、供试品稀释法、供试品稀释法+培养基稀释法相结合、薄膜过滤贴膜法的方法递增去进行方法染菌回收预试验。控制菌项目包括大肠埃希菌、沙门菌、耐胆盐革兰阴性菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌等项目,每个控制菌项目要进行样品阳性菌对照组、样品阴性菌对照组、样品本底组试验验证。油脂类样品用无菌十四烷酸异丙酯进行供试品前处理,水不溶性非油脂类样品用吐温80作为活性剂进行样品前处理。方法的设计还要考虑沉降菌可能带入的影响,而B级洁净度沉降菌的限度是5cfu/4小时。结果:方法必须满足各品种的微生物限度要求,并且具备可操作性。敏感菌株预试验的染菌回收比值达到0.5~2,需氧菌总数进行每个品种3批次样品的金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、铜绿假单胞菌、白色念珠菌、黑曲霉的染菌回收实验,霉菌和酵母菌总数进行每个品种3批次样品的白色念珠菌、黑曲霉的染菌回收试验。每个品种3批次样品的需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数要求的染菌回收试验的染菌回收比值必须在0.5~2内,控制菌样品阳性菌对照组必须检出相应的试验菌,才认为方法可行。结论:所建立的40个中成药的方法,经过微生物限度检查法的方法学验证,符合《中国药典》2015年版四部通则的有关规定,方法可行。