鸡肝脏microRNA-122表达调控机制和功能研究

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Micro RNA是一类单链小分子非编码RNA,在基因转录后水平通过和靶m RNA的碱基配对导致翻译抑制或m RNA降解,参与器官的发育、细胞的分化、增殖、凋亡等多种生物学过程,且和多种疾病密切相关。mi R-122是在肝脏中高表达的mi RNA,在肝脏的生长发育、脂类代谢等过程发挥重要作用,它的异常表达还跟肝脏疾病的发生发展有关。本研究以鸡mi R-122为研究对象,对其表达调控机制和功能方面进行了研究,结果如下:(1)运用生物信息学分析和5’RACE方法确定了鸡mi R-122的转录起始位点位于pre-mi R-122上游的3294(chr Z:757760)位置,用序列删除技术证明鸡mi R-122核心启动子区位于pre-mi R-122上游3.8~3.2 kb区域。(2)为了研究鸡mi R-122的表达调控机制,我们预测到在鸡mi R-122的启动子区含有转录因子HNF3β的结合位点,将这个位点突变后能明显降低mi R-122的启动子活性,用EMSA研究发现HNF3β能够在体外和鸡mi R-122的启动子区结合,推测HNF3β能结合该位点激活mi R-122的转录。(3)通过生物信息学预测和双荧光素酶报告系统证明VNN1和BZW2是mi R-122的靶基因,靶位点突变实验证明VNN1和BZW2基因的3’UTR与mi R-122种子区的互补位点为靶位点。(4)将mi R-122在LMH细胞中过表达后,发现靶基因BZW2 m RNA表达水平显著下降,VNN1 m RNA表达水平没有显著变化。利用LNA-antimi R-122抑制鸡肝脏原代细胞中的mi R-122后,mi R-122的靶基因VNN1和BZW2 m RNA表达水平都呈显著性上升。结果表明靶基因BZW2在m RNA水平上受到mi R-122的负性调控,而VNN1在m RNA水平上不受到mi R-122的调控。(5)靶基因VNN1在不同组织中的表达特征跟mi R-122的表达特征相一致,都是在鸡肝脏中表达量最高,其次是肺,在脾、肾、脂肪中微量表达,在其他组织中表达量极低,表明VNN1和mi R-122之间的联系非常紧密,其在肝脏中可能发挥着重要功能。而BZW2在脾中表达量最高,在鸡肝脏中表达量较低。(6)在不同生长发育时期的鸡肝脏中,靶基因VNN1的表达量有一定的波动,在同一时期不同个体间的差异较大,而BZW2的表达量呈先下降再升高再下降的趋势,推测VNN1和BZW2在鸡肝脏发育时期m RNA水平表达量跟mi R-122不相关。
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