论文部分内容阅读
由大丽轮枝菌引起的黄萎病是世界性的重要土传维管束萎蔫病害,该病原菌分布范围广,寄主多达600多种,一旦爆发会造成严重经济损失。大丽轮枝菌的致病力有很强的变异性,在与寄主和环境协同进化的过程中,常出现生理分化。因此,监测大丽轮枝菌的培养、遗传特性以及致病力是一项长期的基础性工作。为了明确近年来我国棉花和茄子黄萎病菌致病力分化状况,进一步揭示大丽轮枝菌的遗传变异规律,为制定病害防治技术措施提供理论依据,本论文对来自江苏省棉田和茄子病杆的大丽轮枝菌以及少量来自湖北、江西、安徽、新疆、四川棉田,黑龙江茄子病杆,江苏草莓病株的黄萎病菌,进行了培养性状、致病力的测定,并且用PCR方法对其致病类型、携带无毒基因情况和交配型进行了分析,取得了以下结果:从2015-2016年江苏省主要棉区的病杆样品分离纯化黄萎病菌,共获得30株大丽轮枝菌。依据菌株在PDA培养基上培养15 d时产生微菌核的多少,将这30个菌株以及实验室保存的分离自棉花、茄子和草莓上的大丽轮枝菌共计288株分为3种培养类型:菌核型、菌丝型和中间型,其中菌核型150株,占52.1%;菌丝型和中间型分别有68株、70株,所占比例分别为23.6%、24.3%。其中2002-2016年从江苏省主要植棉区总共分离得到178株黄萎病菌,菌核型有97株,所占的比例为54.5%,而在2011～2016年分离的江苏棉田中的96株黄萎病菌中,菌核型菌株占79.7%,表明江苏省棉花黄萎病菌的菌落特征以菌核型为主,已经成为优势种群。选取其中有代表性的菌株在棉花和茄子植株上进行交互致病力测定,结果发现大丽轮枝菌在不同作物上的致病力有明显的分化现象。采用特异性引物对301株大丽轮枝菌的致病类型、携带无毒基因的情况和交配型基因进行检测。采用特异性引物D-1/D-2和ND-1/ND-2PCR检测菌株的致病类型,结果262株从棉田中分离的大丽轮枝菌菌株中,落叶型总共有196株,占比74.8%;非落叶型总共有31株,占比11.8%;没有扩增出条带的总共有35株,占比13.4%。从分子水平上证明,落叶型菌株已成为目前棉花黄萎病菌的优势种群。从茄子上分离的38株大丽轮枝菌以及从草莓上分离的1株大丽轮枝菌的致病类型检测结果都是非落叶型。采用特异性引物(VdAve1F/VdAve1R)PCR检测无毒基因(Ave1)携带情况,并以JR2为阳性对照,结果发现实验室保存的大丽轮枝菌均检测不到无毒基因。采用特异性引物(VdMAT1 11F2/VdMAT111R3 和 VdMAT12F/VdMAT12R)PCR 检测菌株的交配型,结果显示目前实验室保存的菌株都是MAT1-2型,没有发现MAT1-1型。