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猪的繁殖性状,包括初情期、产仔数、初生重等,是现代猪生产中重要的经济性状,繁殖性能的高低直接影响到猪场的生产效率和经济效益;同时,也是一个低遗传力的数量性状,容易受到环境条件的影响。研究猪繁殖性状相关的基因对于揭示影响猪繁殖性能遗传机制和高繁殖力猪的选育具有重要意义。候选基因法是一种定位数量性状基因座(QTL)的主要方法,该方法是依据生物体内已知的或可能的生理生化过程来选择相关基因并对其与表型的关系进行探讨。利用候选基因法定位主效基因在畜禽中已有许多成功的范例,如鸡性连锁矮小基因、猪应激综合征基因、猪雌激素受体基因等。本研究利用候选基因法分析了繁殖性状相关基因FSHβ、FSHR、LHR、PGR、KISS-1、 GPR54与小梅山猪产仔性能的关系。采用混合基因组DNA池与测序技术对上述6个基因的单核苷酸多态性(Single nucleotide polymorphism, SNP)进行筛选;采用PCR-SSCP、 PCR-RFLP、错配PCR-RFLP、直接PCR等技术对SNPs进行大规模检测,并与小梅山猪的繁殖性状进行关联分析;采用RQ-PCR技术研究上述6个基因在小梅山猪下丘脑-垂体-性腺轴系统中的表达规律;采用ECLIA技术研究血清中FSH、LH、E2、P4等生殖激素在不同生长发育阶段中的变化规律。主要研究结果如下:1、以猪FSHβ基因为候选基因,对该基因的外显子区域进行扫描,共发现7个SNP。外显子1区域中未检测出突变位点,但在内含子1中检测出1个SNP,即C5807A;外显子2中检测出1个SNP,即C6699T;外显子3中检测出5个SNP,分别为A8753G、C8766T、 T8788C、A8880G、8943del;上述突变位点中,只有C6699T发生在CDS区域内,但未能引起氨基酸的改变,属于同义突变。小梅山猪、枫泾猪和大白猪FSHβ基因中分别有4、4和3个基因位点表现出多态性,并均为中度多态。连锁不平衡分析结果表明,上述7个突变位点间存在强连锁不平衡现象。相关分析结果表明,FSHβ基因FSHβ-1位点的BB型、FSHβ-2位点的DD型、FSHβ-3.1位点的FF型、FSHβ-3.2位点的HH型与单倍型组合H5H5(BDFH/BDFH)对2胎以上或所有胎次小梅山母猪的总产仔数(Total number born, TNB)和产活仔数(Number born alive, NBA)有显著或极显著影响;方差组分分析结果表明,2胎以上或所有胎次小梅山母猪的TNB和NBA的遗传在各位点上主要受到基因的加性效应的影响,单倍型组合H5H5为一个优势组合,可作为猪繁殖性状选育的一个分子标记。2、以猪FSHR基因为候选基因,对该基因的外显子区域进行扫描,共发现6个SNP。外显子1区域内检测到3个SNP,分别为C70T、C74G、C81T;外显子10中检测到3个SNP,分别为C1166T、T1491C、T1977C;其中,C74G的突变导致苏氨酸变为丝氨酸,即Thr13Ser, C1166T导致苏氨酸变为异亮氨酸,即Thr377Ile,其余突变均未能引起氨基酸的改变,属于同义突变。小梅山猪、枫泾猪和大白猪FSHR基因中分别有3、3和4个基因位点表现出多态性,小梅山猪FSHR-1位点为高度多态,其余为中度多态;枫泾猪的3个基因位点均为中度多态;大白猪FSHR-1位点为高度多态,其余为低度多态。相关分析结果表明,FSHR基因FSHR-1位点的AC型、FSHR-10.4位点的BB型、FSHR-10.5位点的DD型与单倍型组合H3H5对2胎以上或所有胎次小梅山母猪的TNB和NBA有显著或极显著影响;方差组分分析结果表明,2胎以上或所有胎次小梅山母猪的TNB和NBA的遗传在FSHR-1位点上主要受到基因显性效应的影响,在FSHR-10.4与FSHR-10.5位点上主要受到基因的加性效应的影响。3、以猪LHR基因为候选基因,对该基因的外显子区域进行扫描,共发现1个SNP。外显子11中1351bp处发生C→T的突变,即C1351T,未引起氨基酸的变化,属于同义突变。小梅山猪中检测出多态性,而枫泾猪和大白猪中未能检测出多态性。相关分析结果表明,LHR基因LHR-11.4位点的MN型对2胎以上或所有胎次小梅山母猪的TNB和NBA有显著或极显著影响;方差组分分析结果表明,2胎以上或所有胎次小梅山母猪的TNB和NBA的遗传在LHR-11.4位点上主要受到基因的显性效应的影响。4、以猪PGR基因为候选基因,对该基因的外显子区域进行扫描,共发现1个SNP。外显子1中1319bp处发生C→T的突变,即C1319T,未引起氨基酸的变化,属于同义突变。小梅山猪、枫泾猪和大白猪PGR基因中均检测出多态性。相关分析结果表明,对2胎以上或所有胎次小梅山母猪中,PGR基因PGR-1.6位点的AB型个体的TNB和NBA比AA型个体均高。5、以猪KISS-1基因为候选基因,对该基因的外显子区域进行扫描,共发现6个SNP。5’区域内检测到1个SNP,即A7G;外显子1中1个SNP,即G41T;内含子1中3个SNP,分别为633inde1、A859G、C1026A;外显子2中1个SNP,即G2343C。小梅山猪、枫泾猪和大白猪KISS-1基因中分别有4、5和5个基因位点表现出多态性,小梅山猪KISS-1基因中4个位点均为中度多态;枫泾猪中,KISS1-4位点为中度多态,其余位点均为低度多态;大白猪中KISS1-5位点为中度多态,其余位点均为低度多态。连锁不平衡分析结果表明,A7G与G41T、A7G与C1026A、G41T与C1026A间存在完全连锁不平衡现象。相关分析结果表明,KISS-1基因KISS1-3位点的AB型、KISS1-4位点的KL型、KISS1-6位点的MN型、KISS1-7位点的PQ型与单倍型组合H1H5(ALNQ/BKMP)对2胎以上或所有胎次小梅山母猪的TNB和NBA有显著或极显著影响;方差组分分析结果表明,2胎以上或所有胎次小梅山母猪的TNB和NBA的遗传在各位点上主要受到基因的显性效应的影响。6、以猪GPR54基因为候选基因,对该基因的外显子区域进行扫描,共发现3个SNP。外显子1中检测出1个SNP,即T245C;内含子2中1个SNP,即1984-1985bp间增加1个碱基C;外显子5中1个SNP,即T3295C,其中,T245C引起氨基酸的改变(亮氨酸→脯氨酸,即Leu35Pro)。小梅山猪、枫泾猪和大白猪GPR54基因中分别有3、2和3个基因位点表现出多态性,小梅山猪与枫泾猪各位点均为中度多态;大白猪GPR54基因中,GPR54-1.1位点为低度多态,其余2个位点为中度多态。连锁不平衡分析结果表明,1984add与T3295C间存在完全连锁不平衡现象。相关分析结果表明,GPR54基因GPR54-1.1位点的BB型、GPR54-3位点的CD型、GPR54-5.1位点的EF型与单倍型组合H1H1(BDE/BDE)对2胎以上或所有胎次小梅山母猪的TNB和NBA有显著或极显著影响;方差组分分析结果表明,2胎以上或所有胎次小梅山母猪的TNB和NBA的遗传在GPR54-1.1位点上主要受到基因的加性效应的影响,而在GPR54-3和GPR54-5.1位点上主要受到基因的显性效应的影响。7、对小梅山猪FSHβ、FSHR、LHR、PGR、KISS-1和GPR54基因在下丘脑-垂体-性腺轴系统中的表达规律进行研究。结果显示:小梅山猪从初生到5月龄间下丘脑-垂体-性腺轴下各组织中均检测到FSHp、FSHR、LHR、PGR、KISS-1和GPR54基因的表达;不同组织中,FSHβ基因在垂体中均高度表达,输卵管和卵巢则低度表达,4月龄时,FSHβ基因在垂体中的相对表达量是输卵管的54.557倍,其表达水平在不同生长阶段中呈现先上升后下降趋势,4月龄时达到高峰;4月龄前,FSHR基因在下丘脑中高度表达,4月龄之后,则卵巢和下丘脑均为高度表达,而子宫均为低度表达;LHR基因在不同组织中,均以下丘脑为高度表达,4月龄之后,卵巢亦为高度表达;PGR基因在不同组织中,均以子宫为高度表达,4月龄之后,下丘脑和卵巢亦高度表达,垂体均为低度表达;不同生长阶段中,各组织PGR基因表达水平均呈现先上升后下降的趋势,并且均在4月龄达到高峰,尤其是卵巢最为明显;4月龄之后,KISS-1与GPR54基因在下丘脑中高度表达,但4月龄之前,两者表达差异较大,KISS-1基因在子宫中高度表达,GPR54基因则波动很大;KISS-1与GPR54基因表达水平在下丘脑、垂体、卵巢和子宫中的趋势,与FSHβ基因之于垂体、FSHR基因之于卵巢与子宫、LHR基因之于卵巢与下丘脑、PGR之于各组织,是相同的。8、对小梅山猪性发育过程中血清中FSH、LH、E2和P4等生殖激素水平的变化规律加以研究,结果显示:初生时,血清中FSH、LH、E2和P4等生殖激素水平处于高位状态,1月龄~4月龄间可能略有波动,但均呈现上升趋势,至4月龄时达到最高水平,并且差异均达到显著或极限著水平,5月龄时,这4种生殖激素水平又迅速下降;根据上述4种生殖激素的变化规律,并结合生产实践,可以推测小梅山猪的初情期在3.5月龄-4.5月龄间。