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目的:本研究主要通过观察丙戊酸钠(valproic acid,VPA)对体外培养的多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)细胞株RPMI8226及U266细胞中Hedgehog(Hh)信号通路中相关蛋白的影响,初步探讨丙戊酸钠对Hedgehog(Hh)信号通路的作用,为治疗多发性骨髓瘤提供新的治疗思路。方法:实验室培养多发性骨髓瘤细胞株RPMI8226及U266。实验分组:(1)依据不同浓度VPA处理细胞株分为:空白对照组,2、4、8mmol/L VPA组;(2)依据同一浓度VPA(4mmol/L)处理细胞株不同时间分为:0h、18h、24h、36h处理组;(3)依据不同药物处理细胞株分为:空白对照组,4mmol/L VPA组,5μmol/LGANT61组,4mmol/L VPA+5μmol/LGANT61联合组;(4)依据VPA联合GANT61组处理细胞株不同时间分为:0h、18h、24h、36h处理组。应用细胞计数试剂盒-8(cell counting kit-8,CCK-8)法检测各药物实验组对细胞增殖的抑制作用,利用实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,RT-q PCR)和免疫印迹(Western Blot)方法检测各实验组Hedgehog信号通路中的PTCH1受体、GLI1、HES1 mRNA和蛋白的表达情况,结果:1.不同浓度VPA处理细胞株CCK-8检测结果:空白对照组,2mmol/L,4mmol/L,8mmol/L的丙戊酸钠处理RPMI8226细胞系24h后的对细胞的增殖抑制率分别为0.0±0.0%,21.2±1.3%,28.0±1.1%,40.3±0.9%;而U266细胞的抑制率分别为0.0±0.0%,24.1±2.1%,35.1±1.7%,51.0±1.2%。各组抑制率差异具有统计学上意义(P<0.05)。继而我们采用Western-Blot、RT-q PCR检测了各实验组胞株中Hedgehog信号通路相关因子PTCH1、GLI1、HES-1蛋白及mRNA的表达水平的变化,结果显示:PTCH1、GLI1、HES-1蛋白及mRNA的表达随着VPA浓度的升高表达量逐渐降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。2.相同浓度(4mmol/L)的VPA处理MM细胞株RPMI8226及U266细胞不同时间(0h、18h、24h、36h)的抑制情况:RPMI8226细胞的抑制率分别为0.0±0.0%,13.2±1.0%,28.0±1.1%,38.5±2.0%;U266细胞的抑制率分别为0.0±0.0%,20.1±1.4%,35.1±1.7%,43.0±1.3%。各组抑制率差异有统计学意义(P<0.05)。采用Western-Blot与RT-q PCR方法检测了Hedgehog信号通路中关键因子PTCH1、GLI1、HES-1蛋白与mRNA表达的变化,结果显示:与空白对照相比,PTCH1、GLI1、HES-1蛋白及mRNA的表达随着VPA处理时间的延长表达量逐渐降低,差异有统计学意义(P<0.05)。3.不同药物处理RPMI8226细胞24小时后的增殖抑制率:空白组:0.0±0.0%,VPA组:28.0±1.1%,GANT61组:19.3±0.8%,VPA+GANT61组:52.5±1.2%。不同药物处理U266细胞24小时后的增殖抑制率为:空白对照组:0.0±0.0%,VPA组:35.1±1.7%,GANT61组:25.2±1.1%,VPA+GANT61组:66.4±2.8%。各药物组抑制率差异具有统计学意义(P<0.05)。然后应用Western-Blot与RT-q PCR方法检测不同药物组细胞中PTCH1、GLI1、HES-1蛋白及mRNA的表达量的变化,结果显示:VPA单药组和GANT61单药组,与空白对照组相比,Hedgehog相关因子PTCH1、GLI1、HES-1蛋白及mRNA的表达量降低,差异具有统计学意义(P<0.05),且VPA与GANT61联合组Hedgehog相关因子PTCH1、GLI1、HES-1的表达量较单独应用GANT61或单独应用VPA时下降更显著,差异有统计学意义(P<0.05)。4.VPA+GANT61联合组处理不同时间(0h、18h、24h、36h)对多发性骨髓瘤细胞的抑制作用:RPMI8226细胞株抑制率分别为0.0±0.0%,21.1±1.3%,52.5±1.2%,63.2±2.1%;U266细胞株抑制率分别为0.0±0.0%,41.0±1.4%,66.4±2.8%,74.3±1.8%。不同时间处理细胞后的抑制率差异有统计学意义(P<0.05)。然后应用Western-Blot与RT-q PCR方法检测不同药物组细胞中PTCH1、GLI1、HES-1蛋白及mRNA的表达量的变化,结果显示:与空白对照相比,PTCH1、GLI1、HES-1蛋白及mRNA的表达随着联合用药处理时间的延长表达量逐渐降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:1.VPA能够抑制多发性骨髓瘤增殖,且呈浓度-时间依赖性。2.VPA能够抑制多发性骨髓瘤细胞中Hedgehog信号通路相关蛋白的表达。3.VPA联合GANT61抑制多发性骨髓瘤RPMI8226及U266细胞增殖较单药应用更显著,且具有时间依赖性。4.VPA与GANT61联合应用较单药应用能明显抑制多发性骨髓瘤细胞中Hedgehog信号通路相关蛋白的表达。