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木质纤维素是地球上最丰富、最廉价的可再生资源，被认为是最重要的燃料酒精生产的后续资源物质。木糖是木质纤维素水解物中含量仅次于葡萄糖的一种单糖，天然半纤维素如木聚糖的水解产物85％～90%是木糖。木糖的有效利用是木质纤维素生物转化生产乙醇的关键环节之一。 本论文以木糖代谢工程为理论指导，采用分子生物学手段，从近平滑假丝酵母中克隆得到一种新的木糖代谢途径中的关键酶基因——木糖还原酶基因(XYL1)，将该基因克隆到毕赤酵母分泌表达载体pGAPZαA上，成功构建了木糖还原酶分泌表达基因工程菌，并对重组的木糖还原酶的活性进行了初步的研究。其主要研究内容如下： 通过对GenBank中假丝酵母菌属（Candida sp.）木糖还原酶基因序列保守区域的分析，设计了一系列引物，以近平滑假丝酵母的总RNA为模板，采用RACE（Rapid Amplification of cDNA Ends）方法成功获得了一段长为1061bp的近平滑假丝酵母（Candida parapsilosis）木糖还原酶基因cDNA序列，GeneBank上使用BLAST程序进行检索后发现与白色假丝酵母（Candida albicans）的醛糖还原酶（aldosere ductase，XM715658）同源性最高，相似性为80%，并且通过进化关系分析认定本文发现了一种新的近平滑假丝酵母的木糖还原酶基因（GeneBank登录号为：EF033247）。 将获得的木糖还原酶基因开放阅读框克隆到巴斯德毕赤酵母表达载体pGAPZαA的GAP启动子下，构建了分泌型重组质粒，并同源重组到毕赤酵母基因组上进行发酵表达。重组木糖还原酶融合表达有6个组氨酸标签，通过酶联免疫反应分别与抗组氨酸标签的一抗和相应的二抗结合，再经过5-溴-4-氯-3-吲跺磷酸/氮蓝四唑（BCIP/NBT）在原位转变为深蓝色化合物显色，证实该了重组蛋白是克隆表达的目的蛋白。木糖作为底物时酶活测定结果得出该酶具有双辅酶依赖性且NADH的依赖性远远大于NADPH的依赖性。 本论文首次克隆表达了近平滑假丝酵母的木糖还原酶基因，酶活研究表明该酶具有双辅酶依赖性，这对后续研究用于燃料乙醇生产的木糖代谢工程菌的构建具有重要价值。