猪繁殖与呼吸综合征病毒SD2株ORF5/ORF6双基因真核表达载体的构建及在哺乳动物细胞中的表达

来源 :莱阳农学院 青岛农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:shinetar
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为了揭示山东省流行的PRRSV的来源及遗传学背景,并为山东省PRRS的防治提供一种安全有效的疫苗,本研究对PRRSVSD2株的ORF5、ORF6进行了测序,根据哺乳动物细胞真核表达载体pIRESMCSAMCSB多克隆位点的序列和猪繁殖与呼吸综合征病毒SD2株ORF5、ORF6基因阅读框架,同时考虑外源基因的表达量在基因起始密码子的前面加入Kozak序列,分别设计了针对ORF5、ORF6的引物P5s/P5r,P6s/P6r。pIRES和ORF6PCR产物经NheⅠ和EcoRⅠ双酶切后,连接构建pIRES-ORF6。pIRES-ORF6和ORF5PCR产物经XbaⅠ和NotⅠ双酶切后,连接构建pIRES-ORF5ORF6。经PCR、双酶切鉴定和测序证明成功构建了转移载体pIRES-ORF5ORF6。   总之,本研究揭示了目前流行于山东省的PRRSV的来源及遗传学背景,成功构建了能同时表达两种主要保护性抗原蛋白的真核表达载体,并在哺乳动物细胞CHO中成功表达,这在疫苗的研究中是一个很大的突破。本研究为PRRS亚单位疫苗的研制奠定了理论和物质基础,将为PRRS的防治特别是急性PRRS的防治带来新的技术手段;系统的研究了我国福建地区PRRSVORF5序列的遗传变化和系统发育关系。
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