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目的检测病毒性脑膜脑炎患者外周血(PBMCs)和脑脊液(CSF)有核细胞标本中BDV p24基因片段,并对基因扩增产物进行测序鉴定,分析其与标准病毒株之间的差异。探讨BDV感染性疾病与病毒性脑膜脑炎之间的关系,同时也为部分病毒性脑膜脑炎的病因学诊断及其防治提供实验和理论依据。方法用荧光定量套式逆转录酶聚合酶链反应(FQ-nRT-PCR)检测病毒性脑膜脑炎患者及正常人PBMCs和CSF有核细胞BDV p24基因片段,对BDV p24阳性产物FQ-nRT-PCR进行分子克隆和测序分析。结果脑脊液FQ-nRT-PCR检测BDV方法的建立。病毒性脑膜脑炎组样本BDV P24基因片段FQ-nRT-PCR阳性率为(6.5%)显著高于正常对照组(P<0.05)。病毒性脑膜脑炎患者检出的BDV p24基因片段测序结果与马的BDV标准病毒株序列同源性为96%。与C6BV株比较在3个位点出现一致性突变(nt 1658 T→C,nt 1667 A→G,nt 1670 C→T,突变率为3%);与BDV/MDCK株比较在2个位点出现一致性突变(nt 1673 C→T,nt 1676 T→C,突变率2%);与strain V株比较在4个位点出现一致性突变(nt 1649 T→C,nt 1670 C→T,nt 1673 C→T,nt 1694 A→G,突变率为5%),但所有编码的氨基酸没有改变。这些结果确证扩增所得目的基因片段确系BDV p24的相应片段。结论脑脊液FQ-nRT-PCR检测BDV方法的建立。用FQ-nRT-PCR可以特异性扩增出BDV p24基因片段,扩增产物序列与标准病毒株高度同源性,提示病毒性脑膜脑炎的发生可能与BDV感染有关。但在多个位点出现了基因突变,说明感染人类的BDV存在基因多态性。