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目的:探索生物钟基因per1,per2在不同时间段对C6胶质瘤细胞和NIH3T3生物节律性及放疗调控作用,研究per1,per2在过表达状态下对C6胶质瘤细胞和NIH3T3细胞放疗的凋亡率以及增殖能力的影响.方法:利用PMA刺激诱导体外培养的胶质瘤C6细胞和NIH3T3细胞产生昼夜节律。分别取4h,8h,12h,16h,20h,24h等不同时段胶质瘤C6细胞和NIH3T3细胞,应用Real-timePCR在转录水平上定量观察胶质瘤C6细胞和NIH3T3细胞在同一时间点上Period1(Per1), Period2(Per2)的表达差异及不同时间点上同一种细胞上Period1(Per1), Period2(Per2)两种基因表达的差异。取4h,8h,12h,16h,20h,24h等不同时段胶质瘤C6细胞和NIH3T3细胞,给予PI染色后,利用流式细胞仪检测不同时间点下,上述2种细胞的细胞周期分布情况。利用直线加速器,在4h,8h,12h,16h,20h,24h等不同时段对胶质瘤C6细胞和NIH3T3细胞进行照射,利用流式细胞仪检测细胞的凋亡情况,观察其放射敏感性差异。同时利用CFSE检测胶质瘤C6细胞和NIH3T3细胞在不同时段照射后胶质瘤C6细胞和NIH3T3细胞的增殖情况。采取脂质体介导法,分别将per1,per2真核表达载体pcDNA3.1(+)-Per1, pcDNA3.1(+)-Per2转染入细胞体内。48小时后,利用直线加速器照射细胞。利用流式细胞仪检测细胞的凋亡及增殖情况。结果:per2基因在C6和NIH3T3细胞中都可以呈现明显的节律性,且振荡节律约为23-24小时之间;在这种节律表达中,rper2的表达峰值在ZT1,28,谷值在ZT16,40,其中最高点在ZT28,最低点在ZT16并且这种节律振幅随时间的延续越来越小。而mper2的表达峰值在ZT1,24,表达谷值在ZT12,36;最高点在ZT1,最低点在ZT12,其节律振幅同样随时间的延续而变小。mper1在NIH3T3细胞中同样有着明显的节律性且同mper2节律基本一致;而rper1则近日节律不明显,但呈持续的高表达。在胶质瘤细胞,rper2表达高值的时间点,即在ZT24点G2/M期的细胞数明显多于其他时间点的细胞数目;而在ZT16点位于C6细胞绝大多数都阻滞在G0/G1和S期。而NIH3T3细胞则无类似现象。在接受射线照射后,在rper2表达的高值时间点,胶质瘤细胞凋亡率明显高于对照组及其他时间点组;而NIH3T3细胞则结果相反。CFSE活性荧光染料检测增殖则提示,在rper2基因表达谷值时段,胶质瘤细胞的增殖能力强于其他时间点;而NIH3T3细胞则在per1、per2基因表达的谷值,增殖能力最弱。转染后rper2过表达的C6细胞在接受射线照射后的凋亡率明显高于,rper1过表达组及对照组,且增殖能力也明显小于rper1过表达组及对照组。NIH3T3细胞的mper1及mper2过表达组之间,凋亡率并无差异却低于对照组;增殖能力二者也无明显差异,且高于对照组。结论:PMA可以在胶质瘤C6细胞中诱导Per2产生类似于SCN产生的近日节律,且与NIH3T3细胞的节律波动时相有所不同。在Per2基因高表达的时段可以将胶质瘤细胞阻滞在G2/M期,增加肿瘤对射线的敏感性。Per2基因不仅增加肿瘤细胞的凋亡率,同时减弱了胶质瘤细胞的增殖能力,为胶质瘤的治疗提供了新的方向。