论文部分内容阅读
桑叶是国家卫生部认定的药食同源原料。本论文以桑叶为原料,研究了桑叶黄酮的最佳提取工艺及抗氧化活性,同时,采用聚酰胺柱层析技术分离纯化桑色素并研究其对人宫颈癌He La细胞的体外抗肿瘤活性及相关分子机制。本研究为桑叶资源的综合利用提供了理论依据和技术支持。通过单因素和响应面优化试验确定了超声波辅助提取桑叶黄酮的最佳工艺条件:乙醇浓度75%、液料比25:1、超声温度70℃、超声时间1.5 h,此条件下,桑叶黄酮提取得率为2.96%。同时,研究测定了桑叶黄酮的抗氧化活性,包括还原力、DPPH自由基清除能力、ABTS自由基清除能力和Fe2+螯合能力。结果表明,桑叶黄酮的抗氧化活性呈现浓度依赖性模式,当浓度为1mg/m L时,其DPPH自由基清除能力达到93.21%,ABTS自由基清除能力为96.79%,Fe2+螯合能力为75.24%。利用聚酰胺柱层析技术得到纯度为98.81%的桑色素组分,并通过UPLC-TOF-MS/MS和NMR技术对产物进行结构鉴定。以人宫颈癌Hela细胞为模型,进一步研究了桑色素的体外抗癌活性。结果表明,桑色素可有效抑制Hela细胞的增殖并呈现浓度依赖性模式,其半抑制浓度(IC50)为214.28μM;桑色素可诱导Hela细胞周期停滞在G2/M期;此外,桑色素可诱导细胞凋亡的产生,50μM、150μM和220μM桑色素处理Hela细胞48 h后,细胞凋亡率分别达到22.3%、29.1%和41.2%。桑色素通过调控细胞周期相关基因的表达诱导Hela细胞阻滞在G2/M期,经桑色素处理后,CDK1、Cdc25c、Survivin、cyclin B1和CHK2基因的m RNA表达水平明显下降,而p53、p21和Wee 1基因的表达水平上升;同时,桑色素可显著降低Bcl-2、Bcl-x L、AMPK、c IAP-1、c IAP-2、PKCε和NF-kβ基因的m RNA表达水平,提高Bax、Bad、cytochrome c、Apaf-1、caspases-9、DR3、DR5、Fas L、FADD、caspases-10、PARP、PI3K、AKT、m TOR、P70S6K和Smac基因的表达,这表明桑色素通过对不同凋亡通路相关基因表达的调控诱导细胞凋亡;细胞内ROS水平的上升是诱导细胞凋亡的又一重要因素,本文利用流式细胞仪检测到50μM、150μM和220μM桑色素处理后细胞内ROS水平分别为10.27%,11.25%和32.31%,此结果表明桑色素可通过提升细胞内的ROS水平诱导细胞凋亡。