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研究目的:本项目在预实验发现灵芝三萜组分与紫杉醇对ErbB2过表达的乳腺癌细胞有协同抗增殖活性的基础上,深入研究灵芝三萜组分对紫杉醇诱导乳腺癌细胞凋亡的体内外增效作用,为进一步开发我国传统中药材灵芝与紫杉醇联合治疗ErbB2过表达的乳腺癌提供临床前实验研究基础。研究方法:利用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法在体外检测紫杉醇和灵芝三萜组分对HER-2过表达的细胞SKBR-3的增殖抑制作用。利用台盼蓝染色计数法在体外检测紫杉醇和灵芝三萜组分对HER-2过表达的细胞SKBR-3的增殖抑制作用。利用ComPusyn软件分析灵芝三萜组分和紫杉醇对SKBR-3的协同作用。利用蛋白免疫印迹法检测灵芝三萜组分、紫杉醇和两者联合用药对HER-2、AKT、EGFR等相关蛋白通路的影响。通过体内动物实验研究灵芝三萜组分和紫杉醇的联合用药对人乳腺癌细胞裸鼠移植瘤的抗肿瘤作用。提取动物实验的瘤块制成石蜡切片,利用免疫组化法观察灵芝三萜组分和紫杉醇联合用药对HER-2蛋白的影响。研究结果:体外实验表明,紫杉醇对HER-2过表达的SKBR-3细胞增殖有明显的抑制作用,灵芝三萜组分对SKBR-3没有明显的细胞增殖抑制作用。当紫杉醇联合灵芝三萜组分之后,对SKBR-3的增殖抑制作用明显增强,效果比单用紫杉醇要好。灵芝三萜组分本身对SKBR-3的蛋白通路不产生影响。灵芝三萜组分能明显增强紫杉醇对SKBR-3的细胞凋亡通路蛋白的表达作用,并增强PI3K-AKT通路的相关蛋白的阻断作用。通过体内动物实验,可以观察到灵芝三萜组分本身对肿瘤增殖的抑制作用较弱,但是联合紫杉醇用药组后对肿瘤细胞的增殖抑制作用要明显强于紫杉醇单药组。研究结论:综上所述,灵芝三萜组分本身对SKBR-3细胞并没有明显的抑制作用,对细胞通路相关蛋白也没有影响,但是联合紫杉醇后,能够明显的增强紫杉醇对SKBR-3细胞的增殖抑制作用。这说明两者联用后有明显的协同租用。这为紫杉醇的联合用药提供了新的研究基础。