以高附加值蛋白质的分离、纯化为背景，将超临界抗溶剂（SAS）沉淀技术与传统的有机溶剂沉淀法相结合，形成了用加压CO₂从混合溶剂中沉淀蛋白质的新型分离方法。该方法具有环境友好、集成化等特点，符合生物分离技术的发展趋势，具有潜在的实用价值。 首先，建立了一套用于SAS沉淀分离的实验装置，以牛奶中蛋白质为模拟对象，考察了在混合溶剂中超（近）临界抗溶剂CO₂沉淀蛋白质时，助溶剂——乙醇对蛋白质沉淀的影响。结果表明：牛奶中蛋白质的沉淀存在一个临界温度（32℃）和临界压力（2.76MPa），乙醇加入该水溶液体系时，有助于增加CO₂的溶解度，增强了超（近）临界CO₂的沉淀作用，因此，乙醇和CO₂对牛奶中蛋白质呈现双重沉淀作用，使临界沉淀温度和临界沉淀压力下降。当乙醇浓度达到30～40％时，临界沉淀温度和临界沉淀压力降低至30℃和0.98 MPa以下。这一结果也表明，我们实验装置的可操作性，以及SAS过程用于水溶液为主体混合溶剂中蛋白质沉淀的可行性。 第二，通过对乙醇-水混合溶剂中纤维素酶、α-淀粉酶、酸性蛋白酶、碱性蛋白酶等在超（近）临界CO₂中沉淀情况的考察和酶活变化的测定，表明不同的酶在实验条件下沉淀现象和酶活变化规律各异，并总结出含蛋白质（酶）混合物在乙醇-水溶液中进行超（近）临界CO₂处理的三个前提条件，确定了超（近）临界CO₂处理纤维素酶、酸性蛋白酶、碱性蛋白酶等的温度、CO₂压力、乙醇浓度的操作范围。 第三，通过对牛奶、纤维素酶、酸性蛋白酶、碱性蛋白酶等在混合溶剂中进行超（近）临界CO₂沉淀的研究，得到了实验条件下上述溶液中总蛋白质的溶解度数据。 第四，将实验体系近似为CO₂-C₂H₅OH-H₂O三元系，并通过该三元系的相平衡研究，提出了可用于实际工程计算的MESV方程和相应的验算方法，得到了实验条件下可信的相平衡各组分组成数据。 第五，首次建立了在超（近）临界条件下蛋白质在液相中的溶解度数学模型，并利用MESV方程的推算结果，成功地关联了牛奶中蛋白质和纤维素酶中总蛋白质的溶解度数据，该模型关联牛奶和纤维素酶体系的蛋白质溶解率时，平均相对误差（AARD）分别为11.5％（303.15K）、18.1％（308.15K）和7.0％（303.15K）、7.7％（308.15K）。 最后，将首次提出的用加压CO₂从混合溶剂中沉淀蛋白质的新方法，运用于纤维素酶分离纯化和酸性蛋白酶、碱性蛋白酶去除杂蛋白过程。在分析纤维浙江大学博士学位论义 摘要素酶的分离纯化时，引入了“分级沉淀线图”，结果表明最大纯化因子和得率分别可达6．3 3和 62％，省去了脱盐、冷冻干燥等过程。该法对酸性蛋白酶、碱性蛋白酶等也有较好的去除杂蛋白效果。 因此，研究超（近）临界＊0。沉淀法分离纯化蛋白质，不仅在理论上有继续深入和探讨的价值，还具有良好的应用前景。