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猕猴桃由于营养成分丰富,特别是维生素含量高,被誉为水果之王,深受人们的喜欢,具有较好的市场前景。但由于猕猴桃果实是一种呼吸跃变型果实,不耐贮藏,在贮运过程中果实易衰老软化,失去其应有的经济价值,给生产和销售带来很大的困难。呼吸跃变的产生是由于在贮藏过程中大量合成乙烯,并产生一系列的生理生化变化所导致的。乙烯是重要的植物成熟激素,调控果实的成熟衰老过程,通过降低果实内源乙烯的合成,是延长果实贮藏保鲜的最有效途径。在控制内源乙烯生物合成的措施中,反义RNA技术是一种最有效的途径之一,利用反义RNA技术抑制乙烯合成的重要限速酶ACC氧化酶的基因表达,将会有效降低乙烯的内源合成。本研究以海沃德猕猴桃为试材,通过ACO基因的克隆、RNAi表达载体的构建及遗传转化试验的研究,取得如下主要结果：1.成功克隆了猕猴桃ACO基因。利用已登录其他植物的ACO基因序列合成特异引物,扩增并克隆了猕猴桃ACO基因的全长cDNA序列,该基因cDNA序列全长1003bp,其CDS为960bp,编码319个氨基酸残基,该cDNA序列与其它已登录植物的ACO基因的序列同源性高,最高达94%,具有7个保守区序列及ACO基因的其他序列特点和生化特征,确定为ACO基因(GenBank登录号：JQ062390)。2.构建了海沃德猕猴桃ACC氧化酶基因反义表达载体。分别将扩增得到的ACO基因和pCAMBIA1300双酶切后,用T4DNA连接酶连接,成功构建了ACO基因的反义表达载体。将构建好的载体转化农杆菌EHA105,经质粒提取和PCR检测,该反义表达载体构建成功并已转化EHA105,为下一步遗传转化研究提供了转化工具。3.优化了猕猴桃的组织培养体系。该体系的诱导培养基为：MS+6-BA(10mg/L)+NAA(0.2mg/L)+TDZ(0.2mg/L)；继代培养基为：MS+6-BA(0.25mg/L)+NAA(1mg/L)。叶片接种到诱导培养基后,7天左右可以看到叶脉及叶片边缘处开始膨大,愈伤开始生长,猕猴桃叶片愈伤诱导率为100%,20天左右可以继代一次。4.建立了高效、稳定的遗传再生体系。选取米良一号优良单株上无病虫害的1年生硬枝培育成的无菌苗叶片,在含潮霉素等抗生素的筛选培养基YS：MS+6-BA(0.25mg/L)+NAA(1mg/L)+头孢霉素500mg/L+羧苄青霉素400mg/L+潮霉素20mg/L,pH6.0.MS上诱导分化和生根,侵染时农杆菌的OD值为0.6时,愈伤组织浸入菌液中30min,每隔5min摇一次。25-26℃下暗培养3-4d,侵染效果较为理想,成功将RNAi基因转化到离体培养的猕猴桃叶片中,并用PCR检测技术,对转化后的植株进行了鉴定,得到的阳性植株率为71%。实时荧光定量PCR分析结果显示,再生苗ACO基因的表达量低于野生型81%。5.为了阳性优良再生植株后续推扩生产,对嫁接时砧木的影响进行了分析。以普通、高抗3号两种砧木和猕猴桃良种米良1号、红阳及翠玉为试材,研究砧木对各品种果实品质的影响。结果表明,与普通砧木相比,高抗3号能显著提高米良1号的所有指标的含量,除让红阳的维生素C略有降低外,其他指标都有所提高。而高抗3号则使翠玉所有的指标都有所降低。表明高抗3号是很理想的米良1号和红阳转化植株的砧木,不太适合翠玉。