目的：制备转CMV-Cre-EGFP基因小鼠并检测其表达的Cre酶的重组活性。 方法：用Nsi I、AflII双酶切质粒pCMV-Cre-EGFP后，纯化回收3.3kb大小的DNA片段，稀释成2.9ng/ul的注射用DNA溶液，将其用显微注射的方法直接注入超排得到的B6D2F2受精卵的原核内，体外培养至2-细胞后，一部分胚胎继续培养，体外观察转基因的表达情况，其余的移植到假孕ICR母鼠的输卵管内，待其怀孕产仔后，短波光下观察小鼠是否发出绿色荧光，同时抽提鼠尾DNA，用PCR法检测仔鼠是否为转基因阳性动物，将转基因阳性子代与基因组上整合有LoxP位点和LacZ表达框的ROSA26报告小鼠杂交，通过LacZ染色检测Cre重组酶在体内介导重组的功能。通过遗传育种的方法获得纯合子小鼠并建系。 结果：共注射了2391个受精卵，继续培养，有1500个胚胎发育至2-细胞，存活率为62.74％，将1390个存活的胚胎移植到73只假孕ICR母鼠的输卵管内，共有15只移植母鼠怀孕，得到36只仔鼠，PCR检测表明2只为转基因阳性小鼠，其中1只雄性小鼠在短波光下全身发出绿色荧光，它与ROSA26报告小鼠交配产生的后代，LacZ染色后能检测到Cre重组酶活性。通过遗传育种的方法获得三只LY-CreF2纯合子小鼠，并成功建系。 结论：用原核注射法成功制备出转Cre-EGFP基因小鼠，该小鼠能在体内表达Cre重组酶，并能成功地介导LoxP位点间的重组。