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实验一遗传性牙龈纤维瘤病病例报告以及其家系SOS-1基因21号外显子突变检测目的：诊断、分析并治疗我省一例遗传性牙龈纤维瘤(hereditary gingival frbromatosis,HGF)病例,同时完成其已三代发病的HGF家系成员SOS-1基因21号外显子序列分析,确定突变类型,分析其序列改变与HGF发病的关系。材料和方法：1.HGF家系概况2.病例男,10岁,汉族(Ⅲ-4),患者自1岁左右牙龈开始增生,并逐渐随年龄增长而加重,于2007年10月来我院就诊,就诊时可见牙龈呈球状向外突出,无明显牙龈出血及牙齿疼痛。增生牙龈表面光滑呈结节状,质地坚硬,色泽与正常牙龈相同,探诊无出血,牙齿无松动。治疗：牙周基础治疗后,半年时间内于局部阻滞麻醉下分期行前牙区、左上后牙区增生牙龈组织切除术及牙龈成形术,并去除滞留乳牙术中出血不多,术后创面上牙周敷料。术后一周嘱复方氯己定含漱液3次／1日含漱。3.抽取10名HGF家系成员外周静脉血,EDTA抗凝,抽提基因组DNA。其中第Ⅰ代成员2名,Ⅰ-1,Ⅰ-2；第Ⅱ代6名,Ⅱ-1,Ⅱ-3,Ⅱ-5,Ⅱ-7,Ⅱ-8,Ⅱ-9；第Ⅲ代2名,Ⅲ-4,Ⅲ-5。同时从无家族遗传史,无牙龈增生病史的1名正常人种提取外周血,EDTA抗凝,抽提基因DNA,作为对照。14.参照文献合成SOS-1基因21号外显子聚合酶链反应(polymerase chain reaction, RCR)引物1对。5.对家系中3名患者(Ⅰ-2,Ⅱ-7,Ⅲ-4)进行上述引物引导的PCR扩增,对其PCR产物进行直接测序。结果：1.Ⅲ-4术后一周后去除牙周敷料,见创面有白色纤维膜覆盖、无感染、恢复良好,恢复牙龈外形。1个月,3个月,6个月,一年随访,未见复发,牙龈外形恢复良好,面部畸形改善,发音较前清晰。但牙体排列不整齐,有较多散在牙间隙,错合畸形,故转正畸科会诊进行后续治疗。术后病理切片光镜下观察见：牙龈角化上皮略有增厚,上皮钉突延长,上皮下结缔组织中致密粗大的胶原纤维排列成束,内有少量毛细血管和炎细胞浸润。病理表现符合HGF的一般特征,未见特殊改变。2.HGF患者SOS-1基因PCR产物测序：参照www.ncbi.nlm.gov正常SOS-1序列,三名患者exon21PCR扩增区间的DNA序列无异常发现。结论：1.该HGF家系SOS-1基因21号外显子无明确的基因突变。2.有必要进行该家系SOS-1基因的连锁标记研究,来确定是否由于SOS-1其他外显子突变导致病变的发生。3.该患者及其家系根据临床表现以及专科检查可被确诊为遗传性牙龈纤维瘤病节结型。通过手术切除后随访无明显复发。第二部分遗传性牙龈纤维瘤病家系STR连锁标记研究目的：完成我省一个三代显性遗传发病的HGF家系成员SOS-1基因STR连锁标记分析。方法：1.HGF家系概况：同实验一。2.同实验一,抽取HGF家系10名成员外周静脉血,EDTA抗凝,抽提基因组DNA。3.依据文献设计HGF紧密连锁的STR标记D2S1346,D2S2220,D2S2331,D2S2238,D2S2328和D2S2739引物6对,对上述所有HGF家系成员进行D2S1346,D2S2220,D2S233 1,D2S2238,D2S2328和D2S2739的PCR扩增。4.PCR产物经8%非变性聚丙烯酰胺凝胶垂直电泳,银染,定影,干燥。5.按PCR产物泳动速度快慢分别将D2S2220的扩增产物命名为D2S1346扩增产物命名为A1,A2,A3,D2S2220的扩增产物命名为B1,B2,B3,将D2S2331的产物依次命名为C1,C2,C3,将D2S2238的产物依次命名为D1,D2,D3,将D2S2328的产物依次命名为E1,E2,E3,将D2S2739的产物依次命名为F1,F2。实验经反复证实。结果：该家系已经临床确诊的5名HGF患者D2S2328,D2S2238,D2S2331,D2S1346,D2S2220和D2S2739基因型分别为A1B1C1D1E1F1/A3B1C1D1E1F2.A1B1C1D1E1F1/ A2B1C1D3E2F2,A1B1C1D1E1F1/A3B1C1D1E1F2,A1B1C1D1E1F1/A3B1C1D1E1F2, A1B1C1D1E1F1/A3B1C1D1E1F2和A1B1C1D1E1F2/A3B1C1D1E1F2,其中除去Ⅲ-4以外的患者均含有A1B1C1D1E1F1单倍型。而Ⅲ-5为非发病者的基因型为A1B1C1D1E1F1/A3B1C1D1E3F2也含有A1B1C1D1E1F1单倍型。结论：1.STR多态位点D2S2328,D2S2238,D2S2331,D2S1346,D2S2220和D2S2739单倍型A1B1C1D1E1F1与该HGF家系SOS-1基因不连锁。2.该HGF家系的致病基因不是SOS-1基因。