【摘 要】
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目的:1.研究藁本内酯对骨肉瘤增殖、迁移,周期和凋亡的影响。2.研究藁本内酯联合顺铂促进骨肉瘤细胞凋亡作用强于单独使用顺铂。3.藁本内酯发挥上述作用是通过ULK1/ATG3信号通路实现的。方法:第一部分实验,分为对照组和藁本内酯组。第二部分实验分为对照组、顺铂组、藁本内酯联合顺铂组。通过细胞毒性实验检测藁本内酯对骨肉瘤细胞增殖的影响。通过细胞划痕实验检测藁本内酯对骨肉瘤细胞迁移能力的影响。通过流式
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目的:1.研究藁本内酯对骨肉瘤增殖、迁移,周期和凋亡的影响。2.研究藁本内酯联合顺铂促进骨肉瘤细胞凋亡作用强于单独使用顺铂。3.藁本内酯发挥上述作用是通过ULK1/ATG3信号通路实现的。方法:第一部分实验,分为对照组和藁本内酯组。第二部分实验分为对照组、顺铂组、藁本内酯联合顺铂组。通过细胞毒性实验检测藁本内酯对骨肉瘤细胞增殖的影响。通过细胞划痕实验检测藁本内酯对骨肉瘤细胞迁移能力的影响。通过流式细胞仪检测藁本内酯对骨肉瘤细胞周期和凋亡的影响。Western blot检测药物干预骨肉瘤细胞后凋亡相关分子Bcl-2、Bax,Cytochrome C等蛋白的表达情况,以及LC3B、Beclin1等自噬标志性蛋白的表达情况。通过免疫荧光检测骨肉瘤细胞自噬的改变情况。结果:第一部分:细胞毒性实验发现藁本内酯能够抑制骨肉瘤细胞增殖。细胞划痕实验显示藁本内酯能够降低骨肉瘤细胞的迁移能力（P＜0.01）。流式细胞仪检测到藁本内酯能导致骨肉瘤细胞G2/M期细胞阻滞（P＜0.05）,细胞凋亡率升高,呈剂量依赖性（P＜0.01）。Western blot检测发现相比于对照组藁本内酯组Bax表达升高（P＜0.01）,Cytochrome C表达升高（P＜0.05）,抗凋亡蛋白Bcl-2表达降低（P＜0.01）。第二部分:细胞划痕实验发现藁本内酯联合顺铂组对骨肉瘤细迁移的抑制作用大于顺铂组（P＜0.01）。流式细胞仪检测发现藁本内酯联合顺铂组凋亡率高于顺铂组（P＜0.01）。Western blot检测发现藁本内酯联合顺铂组相比于顺铂组Bax表达升高（P＜0.01）,抗凋亡蛋白Bcl-2表达降低,Cytochrome C表达升高（P＜0.05）,自噬蛋白LC3 B、Beclin 1,通路蛋白ULK1、ATG3表达均降低（P＜0.05）。免疫荧光显示藁本内酯联合顺铂组自噬荧光的数量低于顺铂组的趋势。结论:1.藁本内酯能够抑制骨肉瘤细胞增殖,降低细胞迁移能力,导致骨肉瘤细胞G2/M期阻滞,促进骨肉瘤细胞凋亡。2.藁本内酯联合顺铂比单独使用顺铂时骨肉瘤细胞凋亡增加,其发挥作用的机制可能是通过抑制自噬ULK1/ATG3信号通路实现的。3.藁本内酯是一种有抗肿瘤潜力的中药提取物。
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