血栓及血栓性疾病是危害人类健康的“杀手”之一，导致血栓形成的最直接的原因是血小板在血管损伤发生后所经历的一系列反应并最终聚集。而血小板膜糖蛋白GPIIb／IIIa则在这一系列反应中扮演着重要的角色。GPIIb／IIIa又称作整合素imegrin α<,IIb> β<,3>，属于整合素（integrin）粘连受体家族。主要存在于血小板以及其前体细胞巨核细胞表面。他是由非共价键结合的αβ亚基组成的异源二聚体。GPIIb／IIIa在正常的生理止血以及血栓病理形成过程中有着决定性的作用。GPIIb／IIIa的活化并与其配体纤维蛋白原结合是各种血小板激动剂所引起的血小板聚集的最终共同途径。因此针对GPIIb／IIIa的受体阻断药物对于各种诱导因素造成的血小板聚集都能很好的加以抑制。 为了更好的了解血小板膜糖蛋白GPIIb／IIIa与fibdnogen之间的识别结合过程。我们试图采用酵母双杂交系统，结合已有的文献报道以及计算机结构预测，选取了多个可能发生相互作用的蛋白结构域片段，在酵母双杂交系统中进行测试。实验中分别选取了IIIa亚基中的IIIal（55-199），IIIa2（235-385），IIia3（4-454）三个蛋白片段以及IIb亚基中的IIbl（258-424）和IIb2（1-483）2个蛋白片段。同时针对fibrinogen分子，选取了FGA3即整个α链亚基以及α链部分片段FGAl（51-203）和FGA2（498-638）；选取FGG2即整个γ链亚基以及γ链的部分片段FGG1（299-411）。在酵母双杂交系统中分别配对进行相互作用测试，以期待能够找到确切的GPIIb／IIIa与其配体fibrinogen相互作用位点，从而能够借助与反酵母双杂交西系统建立一个针对GPIIb／IIIa的受体拮抗剂药物筛选模型。遗憾的是，所选择的蛋白片段在酵母双杂交系统中均未能显示出相互作用。 鉴于酵母双杂交系统的失败可能是由于GPIIb／IIIa是膜糖蛋白在酵母核内不能正确折叠等各种因素造成。我们转向动物细胞平台，选用中国仓鼠卵巢细胞CHO，将含有GPIIb亚基以及GPIIIa亚基完整序列的质粒共转染CHO细胞，并通过G418筛选，获得稳定表达GPIIb／IIIa蛋白的CHO细胞株，对其进行一系列的蛋白表达测试验证。本实验室前期研究获得了一些体外实验具有抗血小板聚集活性小分子化合物，并且从分子结构上初步推测其作用机理为GPIIb／IIIa的拮抗剂，因此采用稳定表达的细胞株对这几个药物进行初步的毒性测试。而药物的活性测试正在进行中。