体外受精胚胎的体外培养是胚胎体外生产技术的重要环节。胚胎质量直接影响胚胎发育和胎儿生长。本研究首先观察了小檗碱(Berberine,Ber)和miRNA-18b对猪体外受精胚胎发育率、囊胚细胞增殖及凋亡的影响;其次,探讨Ber和miRNA-18b对猪体外受精胚胎内miRNA-18b、IGF-I、IGF-IR和HIF-1α在转录和翻译水平的调控作用,以及检测miRNA-18b的直接靶基因是否为IGF-I、IGF-IR和HIF-1α;最后探讨了Ber和miRNA-18b对AKT通路的调控关系,为提高猪体外受精胚胎体外发育提供理论及数据支持。试验以未添加Ber的NCSU-23胚胎基础培养液为对照组,Ber加入NCSU-23培养液中为Ber组,在对照组的原核胚细胞质中显微注射miRNA-18b过表达剂(agomir)、低表达剂(antagomir)和阴性片段分别为miRNA-18b agomir组、miRNA-18b antagomir组和NC组。观察IVF胚胎2-、4-、8-细胞和桑椹胚、囊胚发育率;囊胚细胞差异染色法、Hoechst33342-TUNEL法分别观察内细胞团和滋养层细胞数、细胞总数和囊胚细胞凋亡数;通过qRT-PCR、Western-blot和双荧光素酶报告基因的方法验证miRNA-18b的靶基因IGF-I、IGF-IR和HIF-1α;Western-blot检测AKT磷酸化水平。结果:Ber和miRNA-18b antagomir,可显著提高猪IVF胚胎发育率、囊胚内细胞团、滋养层、总细胞数和和细胞总数以及内细胞团细胞占细胞总数比率(P<0.01或P<0.05),极显著降低囊胚细胞凋亡数(P<0.01),提高了猪IVF胚胎的发育质量。在4-、8-细胞和桑椹胚期,Ber极显著地下调miRNA-18b的水平,而且miRNA-18b的水平随着胚胎发育呈下降趋势,4-~8-细胞时期更为明显;在4-、8-细胞和桑椹胚期,Ber和miRNA-18b antagomir能显著上调猪IVF胚胎中IGF-I、IGF-IR和HIF-1α表达水平(P<0.01或P<0.05),miRNA-18b agomir显著下调IGF-I、IGF-IR和HIF-1α表达水平(P<0.01或P<0.05);IGF-I、IGF-IR和HIF-1α的表达水平随着胚胎发育呈上升趋势,4-~8-细胞阶段更为明显;双荧光素酶报告基因结果表明在IGF-I、IGF-IR和HIF-1α的3’UTR wt、mut重建载体转染产生的双萤光素酶活性上,miRNA-18b与NC组均无显著差异(P>0.05)。Ber和miRNA-18b antagomir可极显著提高AKT磷酸化水平(P<0.01),miRNA-18b agomir能下调AKT磷酸化水平;AKT磷酸化水平随着胚胎发育呈上升趋势,4-~8-细胞阶段更为明显。结论:Ber能够通过下调4-、8-细胞和桑椹胚时期miRNA-18b的转录水平,促进IGF-I、IGF-IR和HIF-1α的表达,进而促进AKT的磷酸化,促进猪IVF胚胎细胞的增殖和体外发育,其中4-~8-细胞时期作用更为明显。然而,有关猪IVF胚胎中miRNA-18b的直接靶基因的问题还有待今后进一步的研究验证。