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本研究通过11个系列试验，采用人重组VEGF165，研究了血管内皮生长因子（VEGF）对体外生产牛胚胎体外发育的影响。 一、为了确定VEGF是否对体外成熟、体外受精牛胚胎的体外发育能力有促进作用，试验1和2分别选用由卵丘细胞包围的黑白花牛（Holstein）和日本和牛（Japanese Black）的卵母细胞（COC），在改善后的合成输卵管液体（m-SOF）中体外成熟（IVM）22小时（h）、BO液中受精（IVF）6h、m-SOF液中培养42h（IVC1）。各培养过程中每100μl液滴内置入20±2个卵母细胞或受精卵，每种培养液中添加0（对照）、0.1、1.0和10ng/ml四种不同浓度的VEGF进行处理。体外受精后（Pi）48h检测其卵裂率和初期发育率。结果表明，在IVM、IVF、IVC1过程中添加1或10ng/ml VEGF能显著提高胚胎的卵裂率和发育至4-8细胞期的发育率（P＜0.05）。添加0（对照）、0.1、1.0和10ng/ml四种不同浓度的VEGF，黑白花牛和日本和牛的卵裂率分别为41.5、44.7、61.8和55.6％与47.3、51.4、72.6、和68.5％，胚胎发育至4-8细胞期的发育率分别为24.1、23.4、41.1和36.1％与32.0、36.4、59.7和52.9％。 二、为了选择最适宜的VEGF添加浓度，根据试验1和2的结果，在IVM、IVF、IVC1过程中，设计1、2、5ng/ml VEGF的添加浓度。结果表明，1、2和5ng/ml VEGF的添加浓度均可显著提高卵裂率及胚胎发育至4-8细胞期的发育率，分别为49.1、48.5和48.7％与42.7、42.7和45.1％。并且各处理组之间无显著差异。为了得到更多的4-8细胞期胚胎，因而5ng/ml VEGF的 添加浓度为最适宜的添加浓度，并选择此浓度进行进一步研究。 三、为了探明添加VEGF对牛卵母细胞体外成熟、体外受精和胚胎体外发 育的影响，完成了6个不同的试验。． 1、为了检测VEGF对牛卵母细胞体外成熟性的影响，进行了以下3个试． 验，即： 试验4、将Cte分别在0（对照）和5 ＂g／ml VEGF的mSOF液中培养22 h，卵母细胞的成熟率从对照的78．t显著提高到90．5％（P＜0．05）。 试验5、在IW和IVF过程中Cpe分别培养在添加或不添加VEGF的培养 液中。结果表明，当VEGF单独添加于IW培养液或IWh与IVF培养时均添 加VEGP，可显著提高卵母细胞的受精率，分别从对照的63．4％提高到79．8％ 和 82．8（P＜0．05）。 试验6、Cot体外成熟时同试验4一样用VEGP添加或不添加处理，体外 受精与体外培养（至 162 Pi）时不添加 yEGF，其胚胎卵裂率、胚胎发育至 4－8细胞期的发育率和囊胚率显著提高（P＜0．05），处理组与对照组分别为 82．h、70．3％和45．1％与67．3＄、52．5＄和33．3＄。 以上结果揭示，VEGF对卵母细胞的体外成熟具有良好的促进作用。 2、为了检测VEGF对牛胚胎体外发育的影响，进行了3个试验，即： 试验 7、当 COC在体外成熟与体外受精阶段时不添加 VEGF，体外培养0 （IVCI）时在 m－SOF中添加 5 ng／ml VEGF，其卵裂率和胚胎发育至 4－8细胞。期的发育率显著增加（w0．05），VEGr组与对照组分别为70．3％和62．3％与 49．W和38．4＄；而当IVM和IVCI均添加VEGF时则可得到最高的卵裂率 （75．9％）和胚胎发育至 4－8细胞期的发育率（67．8％）。 8 试验8、为探明VEGF对胚胎后期发育的影响，选择4－8细胞期胚胎培养 在含或不含有 VEGF的 mSOF中至第 8天m抢＊，对照组与 VEGF组第 6、7 和 8天时的囊胚率分别为 31．6％、47．8％、57．h和 38．9％、47．9％、52．2％ （＞0．05）。）试验 9、在 48 Pi时，将 IW、IVF和 IVCI过程中添加 VEGF（处理组） 与不添加 VEGF（对照组）的两个组中的 4－8细胞期胚胎分别在无 VEGF的 m－SOF口 液中培养，于第6、7和8天检测其囊胚率，处理组与对照组无显著差异 （P＞0．05），分别为48．6％、65．po、78．8％和48．6％、61．1％、73．6％。 以上结果说明，！VM阶段添加 VEGF可以显著提高卵母细胞的成熟率、受 精率、胚胎的卵裂率、胚胎发育至4干细胞期的发育率及囊胚率；IVCI阶段 添加VEGF也可显著提高胚胎的卵裂率、胚胎发育至4－8细胞期的发育率及囊 胚率；IVCZ阶段添加 VEGF对 4士细胞期胚胎发育至囊胚的发育率提高无显 著效果。因而，可以认为IV’M及IVCI阶段添加VEGF促进胚胎囊胚率的提高 是由于此阶段添加 VEGF显著增加了 4－8细胞期胚胎的数量而致。 四、为了对VEGF促进牛卵母细胞发育