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百里香酚是一种单萜类化合物,抗炎作用是其多种药理活性之一。子宫内膜炎是病原微生物感染子宫内膜而引起的一种生殖系统疾病,给经济动物的治疗带来了巨大困难。然而,百里香酚对子宫内膜炎的抗炎作用及机制的报道相对较少。因此,本实验研究了百里香酚对LPS诱导的山羊子宫内膜上皮细胞(gEECs)炎性反应的抑制作用及机制,为子宫内膜炎的中草药治疗提供科学的理论参考。1.百里香酚对gEECs增殖的影响。采用MTT法检测gEECs的活力,利用瑞氏吉姆萨染色法观察gEECs的形态结构变化,并通过LDH实验测定细胞膜的通透性。结果显示,百里香酚对gEECs的安全浓度为100μg/mL,该浓度范围内药物对细胞的活力和形态结构无显著影响;大于该浓度的百里香酚可显著增大gEECs的膜通透性,造成细胞损伤,产生了细胞毒性。因此,选择浓度分别为100、50、25μg/mL的百里香酚用于后续实验的研究。2.百里香酚对LPS诱导gEECs的炎性因子分泌的影响。将实验分为三组:对照组(control);炎性模型组(LPS);LPS+百里香酚组。LPS添加浓度为5μg/mL,百里香酚添加浓度分别为100、50、25μg/mL。应用NO检测试剂盒检测百里香酚对LPS诱导的NO释放量的影响;利用ELISA检测百里香酚对LPS诱导的炎性因子分泌的影响。结果显示,不同剂量的百里香酚能不同程度地抑制LPS诱导的gEECs中TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10、PGE2、NO及MMP-2、MMP-9的分泌增加。结果表明,百里香酚对LPS诱导的gEECs炎性反应具有显著的抑制作用,且减轻了gEECs因过度的炎性反应造成的结构性损伤。3.百里香酚对LPS诱导gEECs的TLR4/NF-κB信号通路的影响。利用Real-Time PCR方法对细胞因子IL-1β及TLR4信号通路相关节点蛋白CD14、TLR4、TRIF(TICAM)和MyD88的基因表达量进行检测,同时采用RT-PCR方法和WB方法检测了NF-κBp65的基因和蛋白表达量。结果显示,不同剂量的百里香酚能不同程度地抑制LPS诱导gEECs的IL-1β、CD14、TLR4和TRIF(TICAM)基因表达的上调,但对MyD88的基因表达无影响。另外,百里香酚下调了NF-κBp65的基因和蛋白表达水平。结果表明,百里香酚对LPS诱导的gEECs炎性反应的抑制作用可能与抑制TRIF依赖的TLR4/NF-κB信号传递途径的活化相关。总之,百里香酚通过调节炎性因子的分泌发挥其抗炎活性。同时,百里香酚还可抑制TRIF依赖的TLR4/NF-κB信号的传递途径,且对gEECs无显著毒活性,可作为治疗子宫内膜炎的候选药物。