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目的:临床研究检测食管癌瘀毒内结证患者DNA中CYP2C19基因型,通过基因分型检测结果,判定患者的药物代谢速率类型,确定治疗药物冬凌草汤的用法及用量。实验研究通过观察冬凌草甲素诱导体外人食管癌细胞9706凋亡的情况,并探讨其机制。 方法:1、临床研究:治疗组30例患者,检测CYP2C19酶,根据检测结果分为快代谢类型,慢代谢类型,中代谢类型的病例。据此制定个体化治疗方案。中代谢型的病例用冬凌草汤(由冬凌草30克,半边莲30克,半枝莲30克,蟾酥12克,水蛭12克,全虫12克,昆布20克,蜈蚣12克,炙甘草10克组成),每日1剂,水煎至200ml,分2次口服。慢代谢型的病例用冬凌草汤,每2日1剂,水煎至200ml,每日口服100ml.快代谢型冬凌草汤中冬凌草用量增至60克。每日1剂,水煎至200ml,分2次口服。 2、实验研究:体外培养人食管癌9706细胞,用不同浓度冬凌草甲素处理细胞,用MTT法检测冬凌草甲素对食管癌细胞株9706生长抑制作用;倒置显微镜下观察EC9706细胞形态学变化;采用流式细胞仪技术检测冬凌草甲素对食管癌细胞株细胞周期和细胞凋亡的影响,并计算出凋亡率;激光扫描共聚焦显微镜观察不同浓度冬凌草甲素作用后EC9706细胞中Ca2+荧光强度的变化。免疫组化检测Bcl-2、Bax凋亡基因表达水平。 结果:食管癌实体瘤疗效,治疗组完全缓解率为46.67%对照组为6.67%。两组比较有极显著性差异(p<0.01)治疗组部分缓解率为43.33%,对照组为30%.两组比较有显著性差异(p<0.05)。说明根据基因检测结果进行个体化治疗用药的治疗组有效率较对照组高,副作用少,有显著性差异。MTT法显示冬凌草甲素作用人食管癌9706细胞株后,与空白对照组相比,抑制率随时间增长和浓度增高而增高;不同浓度冬凌草甲素作用人食管癌9706细胞株后影响了其细胞形态结构;流式细胞仪检测细胞周期结果显示:冬凌草甲素作用于9706细胞48h、72h后与空白对照组比较均能使G1/G0期细胞显著增多(P<0.05),G1/G0期细胞数量随作用时间增长和浓度升高而增加;细胞凋亡结果显示:冬凌草甲素作用于EC9706细胞株均能明显诱导食管癌细胞凋亡(P<0.05),其作用为40μmol/L浓度组的作用效果最佳。与对照组相比,不同浓度冬凌草甲素均升高了EC9706细胞内Ca2+荧光强度。有显著性差异(P<0.05)。随着冬凌草甲素浓度增加,Bax表达逐渐增强,Bcl-2表达逐渐减弱。 结论:通过基因检测制定食管癌瘀毒内结证治疗方案的治疗组比对照组效果好,毒副作用少。冬凌草甲素有抑制EC9706细胞增殖,阻滞细胞周期的作用,调控凋亡基因,诱导EC9706细胞凋亡。促进EC9706细胞凋亡的能力具有浓度依赖性,为瘀毒内结证食管癌的治疗提供了个体化研究基础。基因检测可以明确药物剂量是否过大,以减轻或避免可能产生的毒性反应及副作用,改变固有观念,拒绝经验和推测。本次临床及实验研究从用药量上体现了食管癌的个体化治疗。