CsHIR1对黄瓜遗传转化的初步研究

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霜霉病是黄瓜(CucumissativusL.)栽培上最主要的卵菌病害之一,严重影响黄瓜的产量和品质。为了初步探讨黄瓜蛋白酶抑制剂基因(CsPI)和过敏性诱导反应蛋白基因(CsHIR1)在黄瓜霜霉病抗性中的作用,本试验以抗病种质“PI088”和感病种质“CCMC”为材料,在转录水平上对CsPI和CsHIR1在黄瓜霜霉病抗性中的表达特性进行分析;构建植物表达载体pCAMBIA35S-CsHIR1,在优化黄瓜再生体系的基础上,通过农杆菌介导法将CsHIR1初步转入黄瓜,取得以下主要结果:1.接种霜霉菌后CsPI和CsHIR1在转录水平上的表达特性分析本试验对接种霜霉菌后0h、3h、6h、12h、1d、2d、4d、7d的CCMC和PI088的叶片进行半定量分析,结果表明在接种霜霉菌4d后感病种质CCMC的CsPI和CsHIR1的表达量显著提高,而PI088在接种初期CsPI和CsHIR1就有较高的表达水平,12h后表达量逐渐降低,说明CsPI和CsHIR1都参与了黄瓜对霜霉菌的抗性反应。2.再生体系的优化本研究以CCMC的子叶节为外植体,通过比较分析发现苗龄为3-5d的外植体的再生率显著高于5-7d苗龄的外植体;以掰取方式获得的外植体的再生率显著高于切取方式获得的外植体的再生率。3.CsHIR1对黄瓜的遗传转化本试验利用In-fusion技术构建植物表达载体pCAMBIA35S-CsHIR1,并以黄瓜抗病种质“PI088”和感病种质“CCMC”的子叶节为外植体,通过优化的农杆菌介导体系初步将CsHIR1基因转入黄瓜中,经PCR检测获得25株阳性株,其中8株阳性株自交授粉得到T1代种子,T1代植株PCR检测阳性率为44.7%;对PCR检测阳性的T1代植株进行实时荧光定量分析,结果显示CsHIR1的表达量总体高于未转化植株,初步证明CsHIR1已经转入黄瓜。
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