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异种间的体细胞克隆技术为保护和拯救珍稀濒危动物、人类器官移植开辟了一条崭新的途径,目前,虽然有种间体细胞核移植动物出生,但是较低的成功率限制了这项技术在实践中的应用。种间核移植仍面临着很大的困难,需要寻求适宜的供受体细胞组合及早期胚胎发育的环境。为了给动物种间核移植研究积累知识和经验,本实验对延边奶山羊-绵羊重构胚的融合、激活做了预先一步的研究。本实验采用延边奶山羊耳皮肤成纤维细胞为供核细胞,以绵羊MⅡ期去核的卵母细胞为核移植受体,构建了山羊-绵羊异质重构胚。我们设计了一系列的试验以优化延边奶山羊-绵羊重构胚的融合激活效果,探讨了不同融合电场强度、脉冲次数、脉冲时程、融合后平衡时间、融合液浓度及激活方法对重构胚融合率及重构胚体外发育率的影响。实验结果如下:1、甘露醇浓度为0.25mol/L、0.28mol/L时重构胚的融合率(50.12%vs52.74%)和卵裂率(53.50%vs55.52%)差异不显著(P>0.05),但与0.30mol/L组相比差异显著(P<0.05),0.28 mol/L组的桑椹胚发育率(17.36%)明显高于其他两组,相比差异显著(P<0.05);2、电场强度为1000v/cm时重构胚的融合率与其它各组之间相比差异显著(P<0.05),电场强度为1200v/cm,1400v/cm以及1600v/cm时重构胚的融合率之间差异不显著(P>0.05);1400v/cm的卵裂率(60.84%)和囊胚率(8.14%)最高,与1200 v/cm相比差异不显著(P>0.05),但与其他各组相比差异显著(P<0.05):3、2次脉冲的融合率与1次脉冲相比差异显著(P<0.05),但与3次电脉冲相比差异不显著(P>0.05);2次脉冲的卵裂率(69.84%)和囊胚率(6.14%)显著的高于1次和3次脉冲,差异显著(P<0.05);,但1次和3次脉冲之间差异不显著(P>0.05)。4、脉冲时程为40 u s时重组胚的融合率(65.56%)高于其他各组,但差异不显著(P>0.05),但是卵裂率(58.90%)与其他三组(10μs、20μs、80μs)相比差异显著(P<0.05)。脉冲时程为40μs的桑椹胚发育率为18.16%,与10μs组、80μs组相比差异显著(P<0.05),但与20μs组相比差异不显著(P>0.05)5、30min、60min、90min、120min不同的平衡时间的融合率差异不显著(p>0.05),但90min组的卵裂率(70.62%)显著高于其他三组,相比差异显著(p<0.05)。90min组的囊胚率为8.10%,显著高于30min和120min组,但与60min组相比差异不显著(p>0.05)。6、EH+CHX、EH+DMAP、Ion+CHX、Ion+DMAP四种激活方式卵裂率方面差异不显著,但是在桑椹胚发育率方面,Ion+6-DMAP组(21.30%)显著高于其他三组(18.90%、14.12%、15.34%), EH+CHX组与EH+6-DMAP组和Ion+6-DMAP组相比差异显著。EH+6-DMAP组和Ion+6-DMAP组之间差异不显著。