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胃癌是世界范围内最常见的恶性肿瘤之一,中国是胃癌的高发国家,其致死率位居全球肿瘤相关致死率第二位。由于缺乏可靠的早期诊断标志,胃癌的预后很差。因此,揭示胃癌的发病机理,寻找有效的抗肿瘤药物成为当务之急。本研究第一部分主要探讨研究肿瘤抑制因子RUNX3对人胃癌细胞BGC823中凋亡相关基因bcl-2、bax、caspase-3、caspase-8、caspase-9表达的影响,以揭示RUNX3促进胃癌细胞凋亡的作用机理。方法:首先构建人RUNX3的真核生物表达载体pcDNA3.1-Runx3,将pcDNA3.1-Runx3及空载体pcDNA3.1分别转染BGC823细胞48小时后,提取细胞的总RNA和蛋白质,应用半定量RT-PCR(Reversetranscription PCR)和Western blot分别检测转染不同载体的细胞内Runx3基因的表达情况,然后用RT-PCR和Western blot检测凋亡相关基因bcl-2、bax、caspase-3、caspase-8和caspase-9的表达,β-actin作为内对照。结果:我们成功构建了人Runx3的真核生物表达载体pcDNA3.1-Runx3,将其转染BGC823细胞后,RT-PCR和Western blot结果均显示:转染pcDNA3.1-Runx3的细胞中RUNX3的表达水平明显高于转染空载体pcDNA3.1的细胞(P＜0.05);转染pcDNA3.1-Runx3的细胞中bcl-2基因的表达水平明显降低,caspase-3、caspase-9基因的表达水平明显增加(P＜0.05)。结论:在BGC823细胞中,RUNX3通过下调bcl-2,上调caspase-3、caspase-9基因的表达促进细胞的凋亡。最新的研究发现化疗能提高一部分进展期胃癌患者的生活质量和存活期。所以对胃癌患者使用化疗药物治疗成为近10年来的热点。但是,临床上应用化疗药物也能杀伤人体正常细胞,造成严重的副作用。为了减少副作用,许多肿瘤学专家凭经验对几种不同的化疗药物进行联合应用;还有许多人致力于研究具有抗癌作用又不增加副作用的药物,但是都没有成功。近十年研究发现小檗碱具有抗肿瘤的活性。有人还发现小檗碱能选择性的杀死肿瘤细胞而对正常细胞没有作用。但是小檗碱抗胃癌细胞的具体分子机制还不清楚。因此,后一部分的研究我们主要探讨了小檗碱在胃癌细胞中发挥的抑制肿瘤细胞生长增殖的作用以及其可能涉及的分子机制。我们的研究通过MTT实验和克隆形成实验发现小檗碱能抑制胃癌肿瘤细胞的生长增殖,并且通过β-gal染色、实时定量PCR、Wsternbloting等实验,发现小檗碱可以通过诱导肿瘤细胞发生衰老发挥其抑制肿瘤细胞生长作用的。这对于人胃癌治疗及新药的研发可能有重要的临床意义。