龙眼(Dimocarpus longan Lour.)属于无患子科(Sapindaceae)龙眼属,是我国重要而有特色的一种亚热带木本果树,也是福建省主要种植的果树之一。LEAFY(简称LFY)同源基因是控制花分生组织形成的基因之一,是决定营养生长向生殖生长过渡的一个关键基因,且LFY基因被认为与启动花芽发育的遗传控制有关。本试验对龙眼LFY同源基因进行克隆,并对龙眼LFY同源基因在花芽分化及“冲梢”过程中的功能进行研究,以探索龙眼花芽分化及成花逆转的分子机理。主要研究结果如下:1.龙眼基因组DNA提取方法的优化。本试验参考了有关果树基因组DNA常用的提取方法,在此基础上结合龙眼本身的特点进行改进,采用改良STE法、改良SDS—KAc法、试剂盒法从龙眼叶片中提取基因组DNA。最终证明改良SDS—KAc法能够有效地去除龙眼叶片中的蛋白质、多糖等次生物质,获得纯净且产率较高的基因组DNA样品。2.龙眼LFY基因5′端序列的克隆。以龙眼基因组DNA为模板,采用染色体步移技术得到长为1516bp的龙眼LFY基因5′端序列。经分析发现该序列与其他物种LFY基因有很高的同源性,确定了龙眼LFY基因编码区的起始位置。3.龙眼LFY基因cDNA全长序列的克隆及基因组全长序列的获得。根据龙眼LFY基因5′端序列和3′端序列设计特异性引物,RT-PCR扩增获得龙眼LFY同源基因cDNA全长序列(LLFY)。经分析该序列与其他其他物种LFY基因核苷酸序列有很高的同源性。该cDNA序列全长1184bp,包含一个1167bp的开放阅读框,编码388个氨基酸。将得到的龙眼LFY基因5′端基因组序列与与之前得到的龙眼LFY基因组部分DNA序列进行拼接,得到龙眼LFY基因组全长序列,大小为3395bp。经分析龙眼LFY基因组序列中包含2个内含子,大小分别为536bp和1391bp。4.龙眼LFY基因的功能研究。采用半定量RT—PCR技术检测花序分化过程、“冲梢”过程中LLFY基因的表达以及比较LLFY基因在“红核子”和“四季蜜”嫁接后新梢中的表达量。结果表明龙眼LFY基因的表达量在花序分化过程有逐渐升高的趋势;在“冲梢”过程则随着变态叶的展开而下降;在“红核子”龙眼嫁接后新梢中没有表达,而在“四季蜜”龙眼接后新梢中有微弱表达。说明LLFY基因与龙眼花序分化及发育有关。5.龙眼LFY基因植物表达载体的构建。将龙眼LFY基因代替载体pC1301PMI—GUS上的GUS基因,构建成pC1301PMI—LLFY载体。