一、基础实验部分目的：了解CD3AK（anti-CD3 monoclonal antibody activated killer cells， CD3AK）细胞的诱导方法及免疫生物学特性，进一步探明其 抗肿瘤作用机理。方法：采用抗CD3单克隆抗体（anti-CD3 monoclonal antibody，CD3McAb）和重组白细胞介素2（recombinant interleukine-2，rIL-2）等共刺激人外周血单个核细胞 （peripheral blood mononuclear cells，PBMC）诱导CD3AK 细胞，用碱性磷酸酶桥联免疫酶标法（APAAP法）分析CD3AK 细胞的表型，四唑盐比色试验（MTT法）检测其对K₅₆₂细胞的最 适宜效靶比，并观察杀瘤活性动态变化及对K₅₆₂、A₂₇₈₀、H₇₄₀₂ 瘤细胞株的细胞毒活性比较。酶联免疫法检测CD3AK与A₂₇₈₀、 H₇₄₀₂共育前后肿瘤坏死因子（TNF）-α、干扰素（IFN）-γ的动 态变化，在透射电镜下观察A₂₇₈₀、H₇₄₀₂凋亡的形态学变化。结果：1、CD3AK细胞增殖动力学观察结果： CD3McAb和rIL-2共刺激诱导的CD3AK和单纯rIL-2诱导的LAK 细胞在培养的前4天扩增倍数相接近（P＞0.05），但以后随着 时间和CD3McAb剂量的递增，CD3AK细胞的扩增倍数远大于LAK 细胞（P＜0.01）。CD3AK细胞至少维持16天的增长趋势。2、CD3AK、LAK细胞表型分析结果： CD3AK细胞是以CD3⁺、CD4⁺、CD8⁺细胞为主的异质性细胞群，其 中CD3⁺、CD4⁺、CD8⁺均显著高于LAK细胞（P＜0.01）。 3、CD3AK细胞对K；；；细胞株杀伤作用的最适宜浓度 ③3北细胞与靶细胞以10：1的效靶比共育时，其杀瘤活性显著 低于20：1和40卜而20＊和40J两组无明显差异，提示CD3AK 细胞对K；。；细胞最适宜的效靶比为20：l。 4、CD3AK细胞的杀瘤活性动态变化观察结果： CD3AK细胞与K；；；细胞共育结果发现，在培养至第4天的CD3AK 细胞即有较高的杀瘤活性，至第10天时达高峰。 5、CD3AK、LAK、NK细胞的杀瘤活性＊较结果： CD3AK细胞对 K；；；、H；。。；细胞的杀伤活性显著高于 LAK、NK细胞吓 ＜O．叮)，但对人；；。细胞株的杀伤活性与＊K、瞅细胞较接近吓 ＞0．05)。 6、CD3AK、LAK与AnM、H川叮共育上清细胞因子TNF－a、IFN－Y 分泌水平检测结果： CD3AK、LAK细胞分另与 A；；；。、H；4；；以 2 0：1、4 0：1的效靶比共育 2 4 h，结果表明作用前后 TNF－a、IFN－Y分泌水平具有显著 性差异p＜0．01厂 共育后H者的分泌水平显著高于共育前。 LAK、CD3AK两组的TNF－a分泌水平达到高峰的时间分别为共 育后sh、12h，而两组IFN－Y分泌水平于作用后sh达到分泌 高峰。 7、CD3AK细胞诱导A；；；。、H，；。；细胞凋亡的形态学观察结果： CD3AK细胞分别与A；；；。、H；；。；共育24小时后，在透射电镜下可见 肿瘤细胞呈典型的凋亡形态学特征：胞核固缩，染色质沿核膜下 呈星月状聚积，胞膜肿胀起泡，可见凋亡小体。 结论CD3AK细胞易于诱导扩增、细胞毒性强，存活时间长，是一种 优于LAK细胞的新型抗肿瘤免疫效应细胞。