论文部分内容阅读
甲型副伤寒沙门氏菌（Salmonella serotype paratyphi A）是一种不产生芽孢,无荚膜的革兰氏阴性杆菌,能够引起急性消化道传染病。甲型副伤寒分布中国各地,常年散发,以夏秋季最多,发病以儿童、青壮年较多。甲型副伤寒沙门氏菌的所在介质和热适应等因素的影响,甲型副伤寒沙门氏菌仍存在于食品当中,威胁着食品安全。甲型副伤寒沙门氏菌的差异蛋白在热刺激方面有非常重要的作用。因此,需要利用蛋白质组学的研究方法研究甲型副伤寒沙门氏菌的耐热机理从而调控甲型副伤寒。本研究:（1）以甲型副伤寒沙门氏菌为研究对象,对其在不同介质中进行热处理,通过测定甲型副伤寒沙门氏菌的残存数量,采用单因素方差分析确定甲型副伤寒沙门氏菌的耐热性大小。运用预测微生物学的方法研究甲型副伤寒沙门氏菌的热失活规律,选择DoseResp模型拟合其失活曲线。结果表明甲型副伤寒沙门氏菌在不同介质中的热抗性存在显著差异。55℃下热处理25.0min,63℃下热处理2.03min,72℃热处理0.31min后,甲型副伤寒沙门氏菌均能被杀死。甲型副伤寒沙门氏菌在蛋白质和脂肪含量高的介质中更耐热。DoseResp模型能够成功拟合甲型副伤寒沙门氏菌的热失活曲线。（2）提取了不同介质中55℃热处理的全菌蛋白,进行iTRAQ结合质谱分析,采用软件Mascot2.2和Proteome Discoverer1.4（thermo）进行查库鉴定及定量分析。鉴定出189个差异蛋白,对这些差异蛋白进行GO注释、GO富集分析和Pathway代谢通路注释分析。结果表明相对于介质肥瘦肉1:1的灌肠,在介质纯瘦肉的灌肠中的DNA裂解酶（ligB）、逆境压力蛋白（dps）、酸分子伴侣（HdeB）和一些未知功能的ACN8920515、ynaF蛋白发生了作用,对胁迫环境进行了适应。（3）提取了介质纯瘦肉的灌肠中热胁迫和正常温度下的全菌蛋白,进行iTRAQ结合质谱分析,采用软件Mascot2.2和Proteome Discoverer1.4（thermo）进行查库鉴定及定量分析。鉴定出205个差异蛋白,对这些差异蛋白进行GO注释、GO富集分析和Pathway代谢通路注释分析。结果表明在介质纯瘦肉的灌肠中热胁迫下甲型副伤寒沙门氏菌的酸分子伴侣（HdeB）、可能的运输蛋白（ygiW）、逆境压力蛋白（dps）、反应调控蛋白（copR）和未知功能的ACN8920515蛋白发生了作用,对热胁迫环境进行了适应。（4）提取了介质肥瘦肉1:1的灌肠中热胁迫和正常温度下的全菌蛋白,进行iTRAQ结合质谱分析,采用软件Mascot2.2和Proteome Discoverer1.4（thermo）进行查库鉴定及定量分析。鉴定出108个差异蛋白,对这些差异蛋白进行GO注释、GO富集分析和Pathway代谢通路注释分析。结果表明在介质肥瘦肉1:1的灌肠中热胁迫下甲型副伤寒沙门氏菌的假定的外排泵蛋白（acrD）、趋药性蛋白（tsr和cheA）、鞭毛运动蛋白（fliG）、DNA结合蛋白（fis）、运动蛋白（motA）、反应调节蛋白（copR）、细胞质海藻糖酶（treF）和DNA转移酶（dam）等蛋白发生了作用,对热胁迫环境进行了适应。