研究目的：通过双向凝胶电泳技术建立肝阳上亢型高血压大鼠与正常大鼠的下丘脑和肾上腺分辨率高、重复性好的蛋白质表达图谱，并分析其差异蛋白质。 研究方法： l、组织标本的处理及总蛋白质的提取：标本取自肝阳上亢型高血压大鼠及正常大鼠下丘脑和肾上腺组织。组织样品于液氮下充分研磨至粉末状，置于组织裂解液中提取总蛋白质，利用2-D Quant Kit试剂盒测出蛋白质总浓度，然后保存于-70℃低温冰箱备用。 2、固相pH梯度双向凝胶电泳：第一向固相PH梯度等电聚焦，主要按IPGphor等电聚焦系统指南和Gorg<[1]>等的方法进行。等电聚焦结束后，将胶条平衡后移至分离胶的上端，进行SDS-PAGE电泳。用考马斯亮兰染色使凝胶中的蛋白质点可视化，ImageScanntier扫描凝胶成像。应用PDQuest7.0软件对肝阳上亢型高血压大鼠及正常大鼠下丘脑和肾上腺组织总蛋白质点进行差异分析。 3、MALDI-TOF，肽质量指纹图谱与数据库搜索：切下20个感兴趣的差异蛋白质点置于EP管中，对染色的蛋白质用脱色液进行脱色，然后100％ACN进行脱水后冻干。再次乙睛脱水冻干，用胰蛋白酶进行原位酶解，37℃酶解24h，12000r／min离心5min，取上清液与萃取后的液体混合冻干浓缩。与CCA基质液混合，点样于不锈钢点样板上，空气中自然风干燥待分析。将制备好的点样板置于MALDI-TOF-Ms仪上进行 分析，获得了肽质量指纹图。利用PeptIdent或Mascott查询软件在SwISS-PROT数据库进行搜索。结合双向凝胶电泳图谱中相应蛋白质点的等电点、分子量、匹配片段的多少以及氨基酸序列的覆盖率进行蛋白质鉴定。 研究结果： 1、在下丘脑组织中肝阳上亢大鼠有22个蛋白质点表达上升，有25个点表达下降。在肾上腺组织中肝阳上亢大鼠有33个点表达上升，有33个点表达下降。 2、从差异的蛋白质点中选取20个点进行质谱分析。发现它们分别是硫氧还蛋白，泛素羟基端水解酶L1，激酶锚蛋白8，钙离子活动相关钾离子通道a亚单位，乙醛脱氢酶前体，谷胱甘肽转移酶Ω1，钙依赖性蛋白激酶和假定蛋白质等。 结论： l、通过双向凝胶电泳技术建立了肝阳上亢型高血压大鼠及正常大鼠下丘脑和肾上腺组织蛋白质组表达图谱。 2、通过凝胶图像分析，比较蛋白质组的差异表达，发现在肝阳上亢型高血压大鼠下丘脑组织中有22个点表达上升，有25个点表达下降；在肾上腺组织中有33个点表达上升，有33个点表达下降。 3、经肽质指纹图谱分析初步鉴定了其中的14个蛋白质，通过生物信息查寻它们分别参与了氧化还原反应，蛋白质降解，离子通道等活动。 4、推测，经2-DE及质谱鉴定出的上述特异蛋白质，可能与高血压肝阳上亢证的形成有关。同时这亦为探索高血压肝阳上亢证的诊断和治疗提供了新的思路，为药物开发提供了靶点。