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灰飞虱和褐飞虱(属半翅目、飞虱科)是水稻的重要害虫,除直接刺吸为害造成损失外,灰飞虱还传播水稻条纹叶枯和水稻黑条矮缩等病毒,造成水稻产量严重损失。三唑磷是一种典型引起害虫再猖獗现象的杀虫剂。井冈霉素是防治水稻纹枯病的抗生素类杀菌剂,由于毒性低,残留低,成本低等特点,很容易被滥用。目前已发现井冈霉素喷雾处理和点滴处理均能刺激褐飞虱生殖。因此本文以灰飞虱和褐飞虱为研究对象,以阐明这两种飞虱受农药处理后生殖机制的变化。1、三唑磷处理后灰飞虱蛋白质组学分析为了研究三唑磷处理后对灰飞虱生殖的影响及灰飞虱再猖獗机制,利用iTRAQ技术对三唑磷处理后灰飞虱进行了蛋白组学分析,共鉴定到6198个蛋白质,其中差异蛋白有217个(上调56个,下调161个)。本次分析共得到118条pathway,表中共列出18条与生殖有关的pathway。通过pathway注释与富集分析,筛选出三唑磷处理显著上调的长链脂肪酸辅酶A连接酶(FACL)进行RNAi以进一步证实该基因在药剂刺激生殖中的作用。2、干扰长链脂肪酸辅酶A连接酶FACL对灰飞虱生殖的影响先对灰飞虱FACL基因进行克隆,得到全长序列。接着利用饲喂法对三唑磷(TZP)喷雾处理的灰飞虱进行RNA干扰,形成干扰处理TZP+dsFACL,随后进行iRNA干扰实验,结果显示取食含有dsFACL人工饲料的灰飞虱的生殖力显著下降,灰飞虱产卵量下降73.9%,产卵历期减少8.9天,雌虫寿命减少7.9天。生理生化测定结果表明,dsFACL处理后体内蛋白质下降4.7%,甘油下降19.9%及体重下降13.6%,因此我们认为FACL是三唑磷刺激灰飞虱生殖的重要相关基因。3、井冈霉素处理后的褐飞虱卵母细胞发育的变化过去药剂刺激褐飞虱生殖有许多报道,但药剂处理对卵母细胞生长和发育的影响不清楚。因此,本研究通过透射电子显微镜(TEM)观察卵母细胞变化和激素水平(保幼激素(JH)和20-羟基蜕皮激素(20E))的变化。TEM观察显示,与对照卵母细胞相比,JGM处理的卵母细胞中脂滴的大小在羽化后1天和2天分别显著减少32.6%和29.8%。JGM处理的雌虫在1和2天的JH水平分别上升了 49.7%和45.7%,而20 E水平分别下降了 36.0%和30.0%。此外,JGM处理的雌虫体内共生菌数量在1和2天分别增加了45.9%和34.7%。我们得出结论,JGM处理影响了褐飞虱脂质代谢,这与以前的研究结果相对应。