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目的(1)研究胰腺癌中次级淋巴组织趋化因子(SLC)及其受体CCR7的表达情况,探讨其表达与胰腺癌临床病理关系;(2)探讨SLC、CCR7的表达与胰腺癌中MVD、MLVD间的关系,阐明其在胰腺癌血管生成、淋巴管生成中的作用。方法收集包括胰腺癌病灶、癌旁组织(距癌2mm以内)、正常胰腺组织和胰周淋巴结的胰腺癌病例30例,临床资料完整并获知情同意。(1)免疫组织化学SP法检测胰腺癌病灶、癌旁组织、正常胰腺组织和胰周淋巴结中的中SLC、CCR7、VEGF-C和VEGF-D蛋白的表达情况,分析SLC、CCR7、VEGF-C和VEGF-D蛋白的表达与胰腺癌临床病理因素的关系,分析在胰腺癌进展和淋巴结转移中的作用;(2)提取标本总RNA进行RT-PCR扩增,检测SLC、CCR7、VEGF-C和VEGF-D mRNA在胰腺癌病灶、癌旁组织、正常胰腺组织以及胰周淋巴结中的表达情况。采用实时荧光定量PCR检测标本中SLC和CCR7 mRNA相对于内参照β-actin mRNA的表达量,并进行定量分析,分析与胰腺癌淋巴管生成和淋巴结转移的关系;(3)以CD34标记血管内皮细胞、VEGFR-3标记淋巴管内皮细胞,免疫组织化学SP法检测胰腺癌中CD34和VEGFR-3的表达情况,形态计量学图象分析法测定MVD、MLVD,并分析与胰腺癌临床病理因素的关系。分析SLC、CCR7的表达与胰腺癌MVD、MLVD之间的关系,阐明其在胰腺癌血管生成、淋巴管生成中的关系和作用。采用SPSS10.0统计软件进行统计学分析。结果(1)免疫组织化学SP法检测发现SLC蛋白主要定位于正常胰腺细胞的细胞膜和/或细胞浆。在30例标本中SLC蛋白在胰腺癌组织中呈低表达状态,阳性率为16.7%(5/30);在癌旁组织和胰周淋巴结均呈中等表达状态,阳性率分别为43.3%(13/30)和46.6%(14/30);而SLC蛋白在正常胰腺组织中高表达,阳性率为76.7%(23/30)。RT-PCR和实时荧光定量PCR结果也证实SLC在胰腺癌中呈低表达状态,在癌旁组织和胰周淋巴结均呈中等表达状态,而在正常胰腺组织中呈高表达状态,与胰腺癌中的表达相比较差异均具有统计学意义(P<0.01)。(2)CCR7蛋白主要表达于胰腺癌细胞的细胞膜和/或细胞浆内,在胰腺癌组织、癌旁组织和胰周淋巴结均呈高表达状态,阳性率分别为76.7%(23/30)、66.7%(23/30)和70.0%(21/30);在正常胰腺组织中呈低表达状态,阳性率为30.0%;同时还发现CCR7蛋白在胰腺静脉平滑肌和淋巴结外脂肪组织也有阳性表达情况。RT-PCR和实时荧光定量PCR结果也证实CCR7在胰腺癌组织、癌旁组织以及胰周淋巴结均呈高表达状态,三者相比较无显著统计学差异(P>0.05),而在正常胰腺组织呈低表达状态(P<0.01)。(3)形态计量学图象分析法测定MVD发现,胰腺癌中/低分化组中MVD显著高于高分化组(P<0.01); TNM分期III～IV期组MVD也显著高于I～II期组(P<0.01);提示MVD与胰腺癌的组织学分化程度、TNM分期显著相关(P<0.01)。而在淋巴结转移阳性组和阴性组中MVD并无明显变化(P>0.05),说明MVD与胰腺癌的淋巴结转移无关。(4)胰腺癌组织中MLVD在TNM分期III～IV期组显著高于I～II期组(P<0.05),淋巴结转移阳性组MLVD显著高于阴性组(P<0.01),提示MLVD与胰腺癌的TNM分期和淋巴结转移密切相关。而MLVD在中/低分化组和高分化组无明显差异(P>0.05);提示MLVD与胰腺癌组织分化程度无关(P=0.194)。(5)30例胰腺癌组织中, SLC蛋白阴性表达者的MVD显著高于阳性者(P=0.012),说明SLC蛋白的表达与MVD有显著的相关性,提示胰腺癌中SLC的低表达与肿瘤的微血管生成的增加具有密切的关系。SLC蛋白的阳性表达者与阴性表达者中MLVD无明显差异(P>0.05),提示SLC与胰腺癌的微淋巴管生成无明显相关性。(6)30例胰腺癌组织中,CCR7蛋白阳性表达者的MLVD明显高于阴性者,两组比较其差异具有显著的统计学意义(P=0.004),说明CCR7可能参与胰腺癌的淋巴管生成过程,其高表达与胰腺癌中微淋巴管的生成有密切关系。(7)30例标本中VEGF-C蛋白在胰腺癌组织、癌旁组织和胰周淋巴结中呈高表达状态,其阳性表达率分别为73.3%、66.7%和63.3%;而在正常胰腺组织呈低表达状态,阳性表达率为43.3%,与胰腺癌中的表达相比具有显著的统计学意义(P<0.05)。VEGF-D蛋白在胰腺癌、癌旁组织和胰周淋巴结中呈中等表达,其阳性表达率分别为56.7%、50.0%和53.3%;而在正常胰腺组织呈低表达状态,阳性表达率为26.7%,与胰腺癌组织中的表达相比有统计学意义(P<0.05)。(8)30例胰腺癌标本中CCR7与VEGF-C蛋白表达均为阳性者19例,表达均为阴性者4例;CCR7蛋白表达阳性而VEGF-C蛋白表达阴性4例,VEGF-C蛋白表达阳性而CCR7蛋白表达阴性有3例;经Spearman秩相关检验,胰腺癌中CCR7与VEGF-C蛋白的表达具有显著的相关性(P=0.038),说明CCR7与VEGF-C的阳性表达可能对胰腺癌的发展起共同促进作用。结论(1)胰腺癌中SLC的低表达与MVD增加密切相关,SLC可能参与胰腺癌中血管生成的调控。(2)CCR7的表达与胰腺癌TNM分期和淋巴结转移密切相关,其高表达对胰腺癌中微淋巴管的生成可能起促进作用。(3)胰腺癌中MVD与其组织学分化程度、TNM分期显著相关,并能反映胰腺癌血管生成的情况;而MLVD与其TNM分期和淋巴结转移密切相关,并能反映胰腺癌淋巴管生成的情况。(4)胰腺癌中CCR7与VEGF-C蛋白的表达具有显著的相关性,两者可能在胰腺癌的淋巴管生成和淋巴结转移中起协同作用。