大豆异黄酮的制备方法及其糖苷水解工艺的研究

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大豆异黄酮是大豆生长过程中形成的次生代谢产物,具有多种生物活性。近年来,大豆异黄酮已成为大豆中最引人注目的功能成分之一,其研究也是食品与营养学研究的热点之一,有着非常广阔的开发应用前景。本文从实际出发,以综合利用大豆资源和生产不同含量的大豆异黄酮产品为目的,以脱脂豆粕为原料,通过大量的对比试验,研究了大豆异黄酮提取、精制、水解的方法,并且对比研究了大豆异黄酮糖苷和苷元的免疫功能。 本文主要研究内容和结论如下: 1.本试验以脱脂豆粕为原料,通过正交试验及方差分析得出,乙醇回流提取法的最佳提取条件:即以50%的乙醇水溶液,1:10料液比,在70℃下提取3h。大豆异黄酮含量为2.75%,得率为6.27mg/g;超声波辅助提取法的最佳提取条件:即以60%的乙醇水溶液,1:8料液比,在40℃下超声(180W,40KHz)提取30min。大豆异黄酮含量为2.80%,得率为6.35mg/g。 2.本试验比较10种不同型号的大孔树脂对大豆异黄酮的吸附性质,确定了HPD-600树脂吸附纯化大豆异黄酮的最佳工艺条件如下:上样液浓度0.15mg/mL、上样液pH值4~5、上样量4.5BV、吸附流速1.0mL/min、静态吸附250min,用80%乙醇作为解吸剂,解吸流速为0.5mL/min,3.0BV的解吸剂即可解吸完全。得到大豆异黄酮粗品含量为20.11%,比粗提物纯度提高了7.18倍。 3.本试验比较了不同溶剂萃取大豆异黄酮的效果,丙酮沸点回流萃取可以得到含量为42.91%大豆异黄酮产品,纯度比含量为20.11%原料提高2.13倍;乙酸乙酯和丙酮组合沸点回流萃取,可以得到含量为70.36%大豆异黄酮产品,纯度比含量为42.91%原料提高1.64倍。 4.本试验以大豆异黄酮糖苷为原料,通过正交试验及方差分析得出,酸法水解最佳工艺条件:盐酸乙醇溶液浓度为3.0mol/L,水解温度为80℃,水解时间为180min,酸法水解率为81.32%;酶法水解最佳工艺条件:在pH6.0的缓冲液体系中,酶解温度为38℃,酶解时间为90min,加酶量为4.0mg(4%),酶法水解率为82.55%。结果表明:酶法水解大豆异黄酮糖苷的效果优于酸法水解的效果。 5.本试验用大豆异黄酮糖苷和大豆异黄酮苷元喂养小鼠后,其鸡红细胞作免疫原的溶血素的光密度值比在相同环境下的空白对照组明显增加,这表明大豆异黄酮糖苷和苷元都能有效地提高小鼠体液免疫功能,同时发现小鼠对大豆异黄酮苷元的吸收效果好于大豆异黄酮糖苷,说明大豆异黄酮苷元的免疫功能优于大豆异黄酮糖苷。
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