论文部分内容阅读
为了对黑果枸杞内生真菌进行深入研究,本课题以20株耐盐碱黑果枸杞内生真菌中的一株抗菌活性较强的曲霉属真菌RER4为研究对象,采用形态学鉴定方法结合分子生物学鉴定方法,鉴定出该真菌为米曲霉(Aspergillus oryzae)。以大米为培养基,对黑果枸杞内生真菌RER4进行固态发酵,发酵物阴干后用石油醚、乙酸乙酯、甲醇依次进行提取,浓缩后得到粗品浸膏205g。化学成分预分析结果表明,黑果枸杞内生真菌RER4次生代谢产物中含有甾体,有机酸,生物碱,内酯类等化合物。采用硅胶柱色谱、凝胶柱色谱及重结晶等手段进行分离纯化,最终得到16个化合物。对16个化合物进行理化性质结合核磁共振、高分辨质谱等分析,确定16个化合物分别为:麦角甾醇、尿黑酸内酯、6-柠檬酸甲酯、琥珀酸、1,5-柠檬酸二甲酯、5-hydroxymethylfuran-3-carboxylic acid、2,5-二羟基苯乙酸甲酯、柠檬酸、pyranonigrins A、 campyrones A、4-乙酰氨基丁酸、 rubrofusarin B、asperpyrones A、赤薛醇、甘露醇、阿拉伯糖醇。目前关于米曲霉化学成分的研究报道较少,尿黑酸内酯、5-hydroxymethylfuran-3-carboxylic acid、2,5-二羟基苯乙酸甲酯、pyranonigrins A、campyrones A、4-乙酰氨基丁酸、rubrofusarin B、asperpyrones A均为首次从米曲霉发酵物中分离得到。黑果枸杞内生真菌RER4次生代谢产物中含有多种吡喃酮衍生物,这使得RER4有望成为一株新的“工程菌”。对化合物尿黑酸内酯、2,5-二羟基苯乙酸甲酯、pyranonigrins A、rubrofusarin B、asperpyrones A做抗氧化实验,实验结果表明尿黑酸内酯和2,5-二羟基苯乙酸甲酯对DPPH的自由基清除率的IC50值与维生素C(IC50=6.93μg/mg)相当。分析5个化合物及Vc的构效关系可得知:化合物抗氧化活性和其结构上易被氧化的基团,及其所处的化学环境有关。以4株细菌(大肠杆菌,绿脓杆菌,金黄色葡萄球菌,枯草芽孢杆菌)和4株植物病原真菌(尖孢镰孢菌,小麦赤霉病菌,苹果树腐烂病菌,番茄灰霉病菌)对16个化合物进行抑菌活性测试,测试结果表明:9个化合物对细菌和真菌生长表现出不同的抑制作用,尿黑酸内酯和2,5-二羟基苯乙酸甲酯对细菌和真菌均表现出较好的抑制作用,pyranonigrins A和asperpyrones A对细菌生长有较好的抑制作用,5-hydroxymethylfuran-3-carboxylic acid对革兰氏阴性菌生长有较好的抑制作用。总之,本课题对黑果枸杞内生真菌RER4次生代谢产物研究,分离到16个单体化合物,通过对这些化合物抗氧化活性和抑菌活性的评价,发现了两个具有较强抗氧化活性的化合物,同时这两个化合物对细菌和真菌生长均有较好的抑制作用。上述研究表明植物内生真菌具有丰富多样的次生代谢产物,是开发新型药物的重要来源。