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目的：本文以疏水亲和层析法纯化牛脑钙调素(CaM)作为免疫原，采用杂交瘤技术制备鼠抗动物CaM单克隆抗体，并对其性质进行鉴定，以期得到高特异性、高效价的抗体，用于CaM生物学功能的研究；应用MTT法，研究胞外CaM及鼠抗动物CaM单克隆抗体对L929成纤维细胞增殖的影响。
方法：
1应用PhenylSepharose6fastflow疏水亲和层析纯化牛脑CaM。
2应用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法和紫外分光光度法鉴定纯化的牛脑CaM。
3应用碳二亚胺法将纯化牛脑CaM与卵清蛋白相偶联作为免疫原，结合杂交瘤技术制备鼠抗动物CaM单克隆抗体。
4应用免疫印迹法、免疫酶斑点法和液相竞争法鉴定鼠抗动物CaM单克隆抗体的性质及效价。
5应用MTT法研究胞外CaM对L929成纤维细胞增殖的影响。
6应用MTT法研究鼠抗动物CaM单克隆抗体对L929成纤维细胞增殖的影响。
结果：
1SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析证实，得到的CaM提取物在近17kDa处有单一蛋白区带，纯度＞99％。
2紫外吸收光谱分析显示，得到的CaM提取物具有典型的CaM特征吸收峰，证实所得到的蛋白提取物为纯化的牛脑CaM。
3以修饰的牛脑CaM作为免疫原，常规免疫方法免疫BALB/c小鼠，ELISA间接法检测免疫小鼠血清抗体效价为10-5，符合制备杂交瘤细胞要求。
4取免疫小鼠脾细胞与Sp2/0骨髓瘤细胞进行融合，融合率为82％，阳性率为5.8％，获得两株稳定分泌抗动物CaM的杂交瘤细胞株，分别命名为3A9和6A10。
5给BALB/c小鼠分别腹腔注入3A9或6A10杂交瘤细胞，所得腹水经提纯后，其蛋白含量约为5mg/ml。
6免疫印迹和免疫酶斑点结果显示该抗体可与固相化的CaM发生特异性的结合，液相竞争法结果显示该抗体可与液相中的天然CaM发生特异性的结合。
7向培养的L929成纤维细胞加入一定浓度的CaM(0.1～7.5μg/ml)，MTT法检测细胞增殖率。直线相关及回归分析结果显示，CaM在此浓度范围内与MTT比色结果呈正的直线相关，r为0.963(P＜0.01=。
8向培养的L929成纤维细胞加入一定浓度的抗CaM抗体(6.25～100μg/ml)，可明显抑制细胞增殖率，且抑制效应随抗体浓度增加而增大；外源加入不同浓度的CaM可逆转抗CaM抗体对细胞增殖的抑制作用。
结论：
1获得了高纯度、高浓度的CaM，该蛋白符合作为免疫原制备抗体和其它生理试验的要求。
2获得了两株稳定分泌抗动物CaM的杂交瘤细胞株，3A9和6A10。该抗体可与CaM发生特异性的结合。制备的高效价的鼠抗动物CaM单克隆抗体，能够满足免疫学试验和生理学试验的需要。
3在一定浓度范围内，外源CaM可以促进细胞增殖。抗CaM抗体可明显抑制细胞增殖率，外源加入CaM可逆转抗CaM抗体对细胞增殖的抑制作用。