大豆疫霉菌(Phytophthora sojae)EGFP基因遗传转化载体的构建

来源 :东北农业大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:liongliong507
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由大豆疫霉菌引起的大豆疫霉根腐病是一种分布广泛,危害极其严重的土传性病害,在环境条件有利于病害发生条件下可导致大豆绝产,是影响大豆生产的主要病害之一。由于大豆疫霉菌的土传特性,目前对于大豆疫霉菌的研究有很大的局限性。本论文以真核表达载体pcDNA3.1(-)/hygro为基本骨架,构建大豆疫霉菌遗传转化载体。利用限制性内切酶酶切、去磷酸化、连接等基因重组技术,将增强型绿色荧光蛋白基因和来自莴苣霜霉菌的ham34基因(作为遗传转化载体的启动子)重组到真核表达载体pcDNA3.1(-)/hygro中,经大肠杆菌转化后对转化子进行酶切验证,测序分析,成功构建了用于大豆疫霉菌遗传转化的表达载体pc-EGFP-H2。该表达载体的构建为EGFP基因在大豆疫霉菌中的表达进而达到标记大豆疫霉菌奠定了基础。表达载体pc-EGFP-H2对大豆疫霉菌的转化将会产生一些突变体,这些突变体对于大豆疫霉菌无毒基因和致病基因等研究也具有重要意义。
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