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我们构建了斜带石斑鱼下丘脑,脑垂体,性腺的SMART cDNA质粒和噬菌体文库.从中筛选克隆了GH/PRL家族的三个成员,并进行了时空表达的研究.通过对石斑鱼GH/PRL的三个成员与其它几种鱼类的相应氨基酸序列,构建了系统分类树,阐明了石斑鱼的系统分类地位,进化关系.同时分析了GH/PRL三个成员间的相互序列比较,探讨了三个成员间的进化关系.根据三个基因的氨基酸序列构建的系统树表明,石斑鱼与金头鲷、金鲈和牙鲆聚成一类,虹鳟与大马哈鱼聚成一类,鲫鱼与鲶鱼聚成一类,鳗鲡成另外一类.根据石斑鱼全长cDNA推断的氨基酸序列的比较表明,SL相对GH和PRL有较高的保守性.石斑鱼的GH,PRL和SL的氨基酸同源性在24％-31％,但其C-端的氨基酸同源性较高,尤其是C-端的3个Cys是严格保守的.其中SL与GH的同源性(30.8％)高于与PRL的同源性(25.6％),GH和PRL的同源性最低(24.1％).运用RT-PCR技术考察了其在石斑鱼不同组织中的SL mRNA的转录水平,结果表明:SL基因在垂体中大量转录,在其它组织中几乎检测不到转录本的存在.选取SL基因开放阅读框的核苷酸序列插入pGEX-KG载体进行原核表达,在大肠杆菌中表达的融合蛋白的分子量约为50kD,并将表达产物为抗原免疫家兔制备了多克隆抗体.以表达的蛋白作为抗原免疫家兔,获得多克隆抗体.采用冰冻切片和FITC标记的荧光染色方法将SL基因初步定位于脑垂体中部,沿着神经组织边缘分布.通过Smart cDNA结合RACE-PCR的方法从石斑鱼性腺文库中克隆了调控性别分化与性别转换的两个基因:P450arom和ER.P450arom基因的cDNA全长为1840 bp,其中编码区为1554bp,编码含有518个氨基酸的蛋白.并运用RT-PCR技术考察了其在石斑鱼不同组织中的mRNA的转录水平,结果表明:P450arom基因在性腺中大量转录,在其它组织中几乎检测不到转录本的存在.ER基因在肝脏和性腺中大量转录,在其它组织中有微量的转录本存在.同时,我们运用切片RNA原位杂交的方法研究了ER的细胞定位,ER mRNA定位在卵原细胞和早期初级卵母细胞的胞质,而在卵母细胞生长期和成熟期,则定位在胞质和核质.