论文部分内容阅读
目的：研究脓毒症对运动神经施旺细胞（Schwann cells，SCs）以及神经肌肉功能的影响，并探讨TLR4/MyD88/ERK通路介导的施旺细胞激活在脓毒症导致骨骼肌无力中的作用及机制。
方法：第一部分实验选择健康雄性野生型C57BL/6J小鼠30只，9~12周，体重20~25g，采用随机数字表法分为两组：假手术组（Sham组，n=10）和手术组（CLP组，n=20）。Sham组小鼠行开腹探查，不予以盲肠结扎穿孔；CLP组小鼠行盲肠结扎穿孔术（caecal ligation and puncture，CLP）构建脓毒症模型，于建模后7天进行指标检测和标本采集，提取坐骨神经行施旺细胞原代培养。第二部分实验选择12只SPF级健康雄性敲除MyD88基因小鼠（MyD88-/--CLP组，n=12），和12只健康雄性野生型C57BL/6J小鼠（WT-CLP组，n=12）。9~12周，体重20~25g，均通过CLP建立脓毒症模型，于建模后7天进行指标检测和标本采集，提取坐骨神经行施旺细胞原代培养，使用施旺细胞原代培养液上清液处理巨噬细胞系Raw264.7细胞。各组小鼠建模后用肌电图检测在体复合肌动作电位（compound muscle action potential，CMAP）；使用电镜检测坐骨神经结构；采用免疫荧光检测施旺细胞和巨噬细胞的表达情况；通过Western-blot检测施旺细胞的TLR4、MyD88、ERK以及p-ERK蛋白表达水平；采用流式细胞术检测施旺细胞的生长周期；通过迁移实验检测巨噬细胞的聚集情况。
结果：（1）神经肌肉功能：CLP组较Sham组CMAP幅值显著减小（P＜0.05），CMAP潜伏期延长（P＜0.05）；MyD88-/--CLP组较WT-CLP组CMAP幅值明显增大（P＜0.05），CMAP潜伏期缩短（P＜0.05）。（2）透射电镜：CLP组较Sham组的坐骨神经水肿和鞘膜增厚明显；WT-CLP组脓毒症时坐骨神经水肿和鞘膜增厚程度较MyD88-/--CLP组重。（3）免疫荧光：CLP组施旺细胞和巨噬细胞增多，且处于增殖状态的施旺细胞比例较Sham组明显增多（P＜0.05）；MyD88-/--CLP组施旺细胞和巨噬细胞减少，且处于增殖状态的施万细胞比例较WT-CLP组明显减少（P＜0.05）。（4）Western-blot：CLP组较Sham组施旺细胞的TLR4、MyD88以及p-ERK/ERK蛋白表达明显增加（P＜0.05）；MyD88-/--CLP组较WT-CLP组p-ERK/ERK蛋白表达水平明显降低（P＜0.05）。（5）流式细胞术：CLP组较Sham组施旺细胞的G0/G1明显降低（P＜0.05），S期比例明显增多（P＜0.05），两组G2+M期差异无统计学意义（P＞0.05）；MyD88-/--CLP组较WT-CLP组施旺细胞的G0/G1明显增加（P＜0.05），S期比例明显降低（P＜0.05），G2+M期比例降低（P＜0.05）。（6）迁移实验：MyD88-/--CLP组较WT-CLP组巨噬细胞迁移率明显降低（P＜0.05）。
结论：1.脓毒症可致神经肌肉功能障碍，运动神经施旺细胞激活，巨噬细胞聚集。2.脓毒症通过TLR4/MyD88/ERK通路激活施旺细胞是脓毒症致获得性肌无力的重要原因。
方法：第一部分实验选择健康雄性野生型C57BL/6J小鼠30只，9~12周，体重20~25g，采用随机数字表法分为两组：假手术组（Sham组，n=10）和手术组（CLP组，n=20）。Sham组小鼠行开腹探查，不予以盲肠结扎穿孔；CLP组小鼠行盲肠结扎穿孔术（caecal ligation and puncture，CLP）构建脓毒症模型，于建模后7天进行指标检测和标本采集，提取坐骨神经行施旺细胞原代培养。第二部分实验选择12只SPF级健康雄性敲除MyD88基因小鼠（MyD88-/--CLP组，n=12），和12只健康雄性野生型C57BL/6J小鼠（WT-CLP组，n=12）。9~12周，体重20~25g，均通过CLP建立脓毒症模型，于建模后7天进行指标检测和标本采集，提取坐骨神经行施旺细胞原代培养，使用施旺细胞原代培养液上清液处理巨噬细胞系Raw264.7细胞。各组小鼠建模后用肌电图检测在体复合肌动作电位（compound muscle action potential，CMAP）；使用电镜检测坐骨神经结构；采用免疫荧光检测施旺细胞和巨噬细胞的表达情况；通过Western-blot检测施旺细胞的TLR4、MyD88、ERK以及p-ERK蛋白表达水平；采用流式细胞术检测施旺细胞的生长周期；通过迁移实验检测巨噬细胞的聚集情况。
结果：（1）神经肌肉功能：CLP组较Sham组CMAP幅值显著减小（P＜0.05），CMAP潜伏期延长（P＜0.05）；MyD88-/--CLP组较WT-CLP组CMAP幅值明显增大（P＜0.05），CMAP潜伏期缩短（P＜0.05）。（2）透射电镜：CLP组较Sham组的坐骨神经水肿和鞘膜增厚明显；WT-CLP组脓毒症时坐骨神经水肿和鞘膜增厚程度较MyD88-/--CLP组重。（3）免疫荧光：CLP组施旺细胞和巨噬细胞增多，且处于增殖状态的施旺细胞比例较Sham组明显增多（P＜0.05）；MyD88-/--CLP组施旺细胞和巨噬细胞减少，且处于增殖状态的施万细胞比例较WT-CLP组明显减少（P＜0.05）。（4）Western-blot：CLP组较Sham组施旺细胞的TLR4、MyD88以及p-ERK/ERK蛋白表达明显增加（P＜0.05）；MyD88-/--CLP组较WT-CLP组p-ERK/ERK蛋白表达水平明显降低（P＜0.05）。（5）流式细胞术：CLP组较Sham组施旺细胞的G0/G1明显降低（P＜0.05），S期比例明显增多（P＜0.05），两组G2+M期差异无统计学意义（P＞0.05）；MyD88-/--CLP组较WT-CLP组施旺细胞的G0/G1明显增加（P＜0.05），S期比例明显降低（P＜0.05），G2+M期比例降低（P＜0.05）。（6）迁移实验：MyD88-/--CLP组较WT-CLP组巨噬细胞迁移率明显降低（P＜0.05）。
结论：1.脓毒症可致神经肌肉功能障碍，运动神经施旺细胞激活，巨噬细胞聚集。2.脓毒症通过TLR4/MyD88/ERK通路激活施旺细胞是脓毒症致获得性肌无力的重要原因。