论文部分内容阅读
目的：最新研究挖掘出的长链非编码RNA（long non-coding RNA,lncRNA)因与肿瘤的发生发展有密切联系而广受各医学领域关注，其可通过转录和转录后水准上调控基因表达、在表观遗传上对肿瘤的发生、发展有重要影响,并且与多种分子信号通路相互作用而和肿瘤转移、侵袭以及患者生存期密切相关。本研究课题检测母系印迹表达基因3（maternallyexpressed gene3, MEG3）、细胞周期激酶抑制因子4b(INK4b)位点的反义非编码RNA（antisense non-coding RNA in the INK4Locus, ANRIL）和重叠转录基因1(overlapping transcript1, TUC338)在结直肠癌和癌旁正常组织中的表达差异。以上三种lncRNA与多种信号通路及遗传物质之间相互作用在广泛水平上参与结直肠癌的发生。通过检测结直肠癌和癌旁正常组织中的的血管密度。探讨MEG3长链非编码RNA、VEGF表达以及血管生成之间的相关性。方法：选取32例结直肠癌患者的肿瘤组织及癌旁正常组织（距肿瘤组织边缘10cm之外的结直肠黏膜层）。应用实时定量PCR（qRT-PCR）方法检测组织中MEG3、ANRIL和TUC338基因的相对转录活性。用免疫组化法检测VEGF在组织中的相对表达水平及血管密度，并与MEG3进行相关性分析。结果：1ANRIL在癌组织中表达活性升高，MEG3在癌组织中表达活性降低实时定量PCR结果显示，81.25%的患者（26/32）癌组织中的ANRIL表达水平高于癌旁正常组织；9.38%的患者（3/31）癌组织中的MEG3表达水平高于癌旁正常组织。经配对t检验分析，ANRIL在结直肠癌组织中表达量明显高于对应的癌旁正常组织（P<0.05）；而MEG3的相对表达量在癌组织中则显著低于对应的正常结直肠组织（P<0.05）。2TUC338在癌组织及癌旁正常组织中表达活性无明显异常根据实时定量PCR结果，65.63%的患者（21/32）癌组织中的TUC338表达水平高于癌旁正常组织。经配对t检验分析，TUC338的相对表达量在癌组织中与对应正常组织中无明显统计学差异（P>0.05）。3ANRIL、MEG3和TUC338在癌组织中的表达水平与肿瘤病理特征的相关性根据实时定量PCR结果与患者肿瘤病理特征进行相关性分析，采用独立样本t检验分析方法对数据进行处理。结果显示，ANRIL、MEG3和TUC338三种lncRNA表达水平与肿瘤分化程度(低分化与中分化)、浸润深度（未侵及浆膜与侵及浆膜）淋巴结转移及发生部位（结肠与直肠）等病理特征均无显著性相关关系（P＞0.05）。其中TUC338表达水平与结肠癌肝转移无显著相关（P＞0.05）。4VEGF在癌与癌旁正常组织中的表达差异免疫组化染色结果显示，65.63%的患者（21/32）癌组织中的VEGF表达水平高于癌旁正常组织，经配对t检验分析，癌组织中的VEGF表达水平显著高于癌旁正常组织，差异有统计学意义（P<0.05）；应用独立样本t检验分析显示，VEGF蛋白表达与肿瘤分化程度(低分化与高分化)、淋巴结转移、浸润深度（未侵及浆膜与侵及浆膜）及发生部位（结肠与直肠）均无统计学相关性（P＞0.05）。5结直肠癌组织中VEGF表达量和血管密度与MEG3相对表达量的相关关系根据5个低倍视野下32例癌组织中各血管密度与根据实时定量PCR结果中MEG3的相对表达量进行Pearson相关性分析，结果显示二者之间存在负相关关系（r=-0.352，P <0.05）。32例癌组织中VEGF相对表达量与MEG3的表达量同样存在负相关关系（r=-0.297，P <0.05）。结论：1与癌旁正常组比较，结直肠癌组织中ANRIL表达升高，MEG3表达量降低。2MEG3、ANRIL、TUC338表达水平与肿瘤进展、病理类型及肿瘤发生部位无关；3结直肠癌组织中VEGF蛋白表达水平增高，且与MEG3表达量呈负相关。4、结直肠癌组织中的血管密度显著高于癌旁正常组织，与MEG3的表达量存在负相关关系。