鸡的基因转移及用于禽蛋生物反应器基因元件的制备

来源 :中国科学院动物研究所 | 被引量 : 0次 | 上传用户:shade89
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为了制备转基因鸡生物反应器所需要的输卵管特异表达的调控序列。该文用PCR法克隆了鸡清蛋白基因5端2995bp(简称OVP)和3端非翻译区的646bp(简称OV3)。以OVP作为调控序列,以质粒pCMVβ为基础,构建了与β-gal基因融合的表达载体pOVΔβ,以OV3取代pOVΔβ中3端的SV40polyA,构建了表达载体pOVβ。将pOVΔβ和pOVβ用脂质体转染培养的原代鸡输卵管上皮细胞及鸡胚成纤维细胞进行瞬时表达。卵清蛋白没有明显的信号肽序列,为了摸索外源基因在鸡输卵管上皮细胞的分泌表达,设计了含OV基因前5个外显子融合型表达载体pOVE5EGFP及含LTR和鸡溶菌酶基因信号肽序列的通用表达载体,构建工作已取得初步成果。该研究拟用EPO作为目的基因。由于涉及知识产权问题,作者通过PCR方法获得了编码EPO成熟蛋白的基因组序列。经部分序列比较分析,初步证明扩增的EPO基因是正确的。该基因将被克隆到已构建的通用表达载体中,以获得EPO的分泌表达。为了最大限度的获得外源蛋白的表达,避免造成输卵管饱和的合成机制,拟用反义RNA部分抑制卵清蛋白的表达。
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