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目的:铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,PA)是重要的医院感染病原菌,在临床上常引发肺部及术后伤口等严重感染。氨基糖苷类抗生素以其强大的杀菌作用,常与β-内酰胺类抗生素一起用于治疗临床严重革兰阴性菌的感染。近年来,PA已向多重耐药甚至泛耐药趋势发展,因此对其耐药特性及机制的研究显得尤为关键。本文回顾分析了皖北地区某院2014～2016年PA菌株的临床耐药特性,并检测其对氨基糖苷类抗生素的耐药基因,进一步探讨耐氨基糖苷类PA的外排泵机制,并通过ERIC-PCR对其进行同源性分析,为临床合理使用抗菌药物,防止克隆菌株的流行和扩散提供实验室理论依据。方法:1.收集2014年1月～2016年12月某综合性医院临床分离的铜绿假单胞菌813株,按照全国临检操作规程和CLSI 2016药敏执行标准,菌株鉴定采用法国BIOMERIEUX公司VITEK 2 compact全自动微生物分析仪进行鉴定和药敏试验,用纸片扩散法(K-B法)复核药敏结果,采用WHONET 5.6软件和卡方(χ~2)检验进行统计学分析,了解本地区PA菌株的临床感染分布和耐药情况。2.对筛选出的54株耐氨基糖苷类PA菌株,用PCR法检测16个氨基糖苷类修饰酶(AMEs)基因和5个16S rRNA甲基化酶基因,明确本地区耐氨基糖苷类PA菌株的基因类型。3.采用外排泵抑制剂MC207110 PaβN联合庆大霉素和阿米卡星的协同试验对54株耐氨基糖苷类PA菌株进行外排泵表型的筛选。4.利用ERIC-PCR技术对54例耐氨基糖苷类PA菌株进行同源性基因分型并结合相应的临床资料进行流行病学分析。结果:1.2014～2016年某院PA的菌株分离率占临床分离革兰阴性菌的比例分别为9.2%、8.1%、8.9%。临床分离PA以多重耐药菌株(MDR)为主,泛耐药菌株(XDR)未见明显升高。标本来源以痰液为主,临床分布以ICU为主,药敏结果显示:PA对11种药物耐药率变化显著(P均<0.05),多数抗菌药物2015年耐药率比2014年明显下降,2015年和2016年之间又出现波动,对于PA的首选药物哌拉西林/他唑巴坦、头孢他啶、庆大霉素和妥布霉素,2016年耐药率在12.2%~28.5%之间,对于PA的次选药物,耐药率是10.9%~32.1%,耐氨基糖苷类PA对β-内酰胺类、碳青霉烯类抗生素、喹诺酮类抗生素耐药,对三、四代头孢类抗菌素敏感。2.PA对氨基糖苷类抗生素耐药的主要基因为5种AMEs基因ant(3’’)-I、aac(3)-IIc、ant(4’)-Ia、aac(6’)-Ib和ant(2’’)-Ia以及2种16S rRNA甲基化酶基因rmtB和armA。3.54株氨基糖苷类耐药PA中有1株外排泵抑制剂联合庆大霉素和阿米卡星的协同试验阳性。4.54株耐氨基糖苷类PA ERIC-PCR图谱分型显示有14型,存在克隆株,其中1型13株,2型和11型各9株,主要发生在ICU病区。结论:1.2014～2016年某院MDR-PA检出率显著升高,耐氨基糖苷类PA的耐药情况严重,应加强抗生素的合理使用。2.AMEs和16S rRNA甲基化酶是介导本地区PA对氨基糖苷类抗生素高度耐药的主要原因之一,其耐药机制中外排泵系统存在。3.本次实验耐氨基糖苷类PA部分菌株高度同源,个别科室存在克隆传播的可能。因此需控制MDR的传播,防止院内感染的发生。