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背景及目的宫颈癌(cervical cancer)是女性最常见的生殖道恶性肿瘤之一,在全球范围内,每年约有20多万女性死于宫颈癌,目前宫颈癌仍然是导致我国妇女死亡的主要原因之一,我国每年新发现131 500个病例,且宫颈癌的发生率有上升和年轻化趋势。WAPL(wing-apart like)蛋白作为一种新的调控异染色体结构的基因产物,首先在果蝇体内被证实。研究表明人体内WAPL的同源基因产物hWAPL(human wing-apart like)蛋白是一种凝集蛋白结合蛋白,它通过与凝集蛋白的调节亚基直接相互作用,使凝集蛋白在细胞分裂初期从染色体臂及时分离。hWAPL基因在宫颈癌中呈现高表达,并且hWAPL基因表达水平与宫颈病变程度呈正相关。在人类疾病中,很多疾病是由基因变异导致的,单核苷酸多态性(singlenucleotide polymorphism,SNP)是指在基因组水平上由单个核苷酸的变异所引起的DNA序列多态性,是人类基因组遗传变异中最普遍的形式。其中,能代表其它位点信息的SNP位点称为标签SNP(tagSNP),少数几个tagSNP就能够提供该区域内大多数的遗传多态模式,从而大大提高关联分析的有效性,即通过较少的SNP位点达到更强的统计学效果。目前,一些文献都揭示了WAPL基因与宫颈癌之间存在着某种关联性,然而关于WAPL基因上的SNP位点与宫颈癌之间的关联性研究国内外尚未见有报道。本课题的目的是通过检测nWAPL基因tagSNP在汉族妇女宫颈癌患者的分布特点,筛查可能与宫颈癌发病相关的tagSNP位点,为进一步发现宫颈癌的发病原因及预防和治疗提供线索。材料和方法收集2008年8月至2009年10月河南省六家市级及省级医院300例同期住院妇女的抗凝全血标本,病例组150例,血标本来自经常规病理确诊的宫颈癌患者,患者采血前均未进行化疗或放疗,其中宫颈鳞状细胞癌132例,宫颈腺癌18例,年龄23岁～67岁,平均年龄48岁；对照组150例,血标本取自同期住院的宫颈正常的患者,其中子宫肌瘤129例,盆腔脏器脱垂21例,年龄27岁～78岁,平均年龄53岁。所有妇女均为汉族人。应用离心柱型全血基因组DNA快速提取试剂盒提取300例含0.4%EDTAK2(乙二胺四乙酸二钾)的抗凝全血的DNA。琼脂糖凝胶电泳(SDS-AGE)技术及凝胶成像系统对提取的全血DNA进行检测和质量控制。应用基质辅助激光解吸附电离飞行时间质谱(MALDI-TOF)检测技术对选出的hWAPL基因的12个tagSNPs位点进行检测应用。应用SPSS15.0和Haploview4.2软件统计对hWAPL基因基因型、等位基因型和单体型的数据进行统计分析,初步筛选与宫颈癌相关的hWAPL基因的tagSNPs位点。其中,基因型与等位基因型分布频率用χ2检验,同时计算OR值和95%可信区间(CI),所有检验均为双侧检验,检验水准α=0.05。结果1本报告所涉及的所有SNP位点等位基因和基因型的观察值和期望值吻合良好,均符合Hardy-Weinberg平衡定律。2病例组和对照组中,hWAPL基因的SNP位点rs11595882的危险等位基因位点T(0.163:0.073,χ2=11.36,P=0.001,OR=2.481).rs10887621的危险等位基因位点C(0.880:0.820,χ2=4.235,P=0.040,OR=1.610).rs11202058的危险等位基因位点G(0.800:0.730,χ2=4.088,P=0.043,OR=1.479),在病例组中的频率明显高于对照组。3危险型基因型与非危险型基因型频数比较,病例组与对照组等位基因型分布统计结果显示：位点rs7083506的(CC+CT)/TT等位基因型(χ2=6.522,P=0.011, OR=3.273,95%CI=1.261-8.493)；rs11595882的(TT+TC)/CC等位基因型(χ2=10.03,P=0.002,OR=2.510,95%CI=1.406-4.482)；rs7918136的(TT+TA)/AA等位基因型(χ2=6.522,P=0.011,OR=3.273,95%CI=1.261-8.493)；rs11202058的(GG+GA)/AA等位基因型(χ2=6.522,P=0.011,OR=3-273,95%CI=1.261-8.493).四个位点危险型在病例组中的分布频率明显高于对照组。4根据12tag SNP位点在所检测人群中的分布得到10种单体型,其中,单体型H8(CCCCACCTGTCG)、单体型H10(CCCCATCTGTCG)在病例组中的频率均高于对照组,且都存在显著差异(P<0.05)。结论1、hWAPL基因的单核苷酸多态位点rs11595882 T、rs10887621 C、rs11202058 G在宫颈癌患者中的分布存在明显差异,说明hWAPL基因遗传多态性与汉族妇女宫颈癌的发生有关,是宫颈癌发生的易感基因之一2、单体型H8(CCCCACCTGTCG)和H10 (CCCCATCTGTCG)