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功能性消化不良（FD）是上消化系统常见的功能性疾病之一,临床上的主要症状包括嗳气、早饱、呕吐和上腹部疼痛。据统计约有40%～70%的人群深受FD的困扰,但患者的胃肠道没有结构、形态或组织异常。目前研究表明胃对扩张刺激高敏（GHS）是导致上腹部疼痛的重要原因,但由于缺乏FD患者和健康志愿者的组织标本,GHS的发病原因和分子机制尚不明确。因此,建立能够模拟FD症状如GHS的动物模型,对临床有效治疗内脏痛至关重要。生命早期的不良刺激,如严重的心理应激、炎症和创伤等,都可能导致成年出现FD。孕期应激（PMS）可以影响子代的组织结构和功能,导致胃肠道疾病的发生,而在胚胎发育过程中表观遗传学修饰对细胞内的微环境变化非常敏感。鉴于目前FD的发病机理尚未完全阐明,亦缺乏有效的临床治疗手段,严重影响患者的生活质量,我们将从表观遗传学的角度探讨FD的发病机制,为临床治疗慢性内脏痛的新靶点提供依据。1.研究目的（1）建立PMS大鼠模型,并探讨PMS能否诱导成年子代大鼠出现胃部痛觉高敏及其相关的电生理机制;（2）探讨酸敏感性离子通道（ASICs）在PMS诱导的胃部痛觉高敏大鼠模型中的作用及表达变化;（3）探讨asic1基因启动子区Cp G岛的DNA甲基化状态;（4）探讨ASIC1表达上调的DNA去甲基化机制;（5）探讨转录因子核因子-κB（NF-κB）与asic1基因启动子区的结合情况;（6）探讨NF-κB在PMS成年子代大鼠胃部痛觉高敏中的作用。2.实验方法（1）将怀孕的SD大鼠分成实验组（PMS）和对照组（CON）,PMS大鼠从怀孕第7天开始进行异源型间隙性应激（HIS）,直至分娩,CON大鼠不做处理。子代出生后,挑选雄性个体,待大鼠成年后（6周）应用胃部球囊扩张（GD）及肌电图（EMG）分析技术评测PMS大鼠的胃部痛觉高敏行为反应。（2）胃壁内注射荧光素（Dil）逆行标记胃特异性DRG神经元,运用全细胞膜片钳技术检测神经元的兴奋性和ASICs电流的变化。（3）运用RT-PCR和Western Blot方法检测大鼠胃相关DRG内ASICs、NF-κB、DMNT1,DNMT3a、DNMT3b、Gadd45a、MBD1、MBD2、MBD4和TDG表达变化。（4）运用免疫荧光化学方法检测ASICs和NF-κB在大鼠胃相关DRG神经元内的表达分布。（5）运用甲基化特异性PCR（MSP）方法检测大鼠胃相关DRG内asic1基因启动子区的DNA甲基化状态。（6）运用染色质免疫沉淀（Ch IP）技术检测胃相关DRG内NF-κB与asic1基因启动子区的结合情况。（7）鞘内注射ASICs抑制剂Amiloride或NF-κBp65 sh RNA慢病毒检测内脏痛行为反应,以确定ASICs和NF-κB是否参与PMS成年子代大鼠的胃部痛觉高敏。3.实验结果（1）与CON组相比,PMS成年子代大鼠出现明显的胃部痛觉高敏,同时PMS成年子代大鼠的胃特异性DRG神经元的兴奋性增加,ASICs的电流密度增大。（2）鞘内注射ASICs抑制剂Amiloride能够减轻PMS成年子代大鼠的胃部痛觉高敏,并且能够降低PMS大鼠胃特异性DRG神经元的兴奋性,减少ASICs的电流密度。（3）ASIC1、ASIC2和ASIC3在胃特异性DRG神经元内均有表达;ASIC1蛋白和m RNA在PMS成年子代大鼠胃相关DRG内表达显著增加,而ASIC2和ASIC3的m RNA表达则没有变化;ASIC1主要表达于Neu N标记的神经元,而在GS标记的卫星胶质细胞没有表达;在神经元又主要表达于CGRP标记的肽能神经元和NF200标记的大神经元,而在IB4标记的非肽能神经元没有表达。（4）PMS成年子代大鼠胃相关DRG内asic1基因启动子区Cp G岛去甲基化明显增加;与CON组相比,PMS组大鼠胃相关DRG内DNMT1和DNMT3b的m RNA表达水平显著降低,而DNMT3a,Gadd45a,MBD1,MBD2,MBD4和TDG的m RNA表达没有变化。（5）PMS成年子代大鼠胃相关DRG内NF-κB的表达增加,且NF-κB与ASIC1在大鼠胃相关DRG神经元内有共表达。（6）在线软件预测显示asic1基因启动子区Cp G岛上存在2个NF-κB结合位点,Ch IP实验结果显示PMS成年子代大鼠胃相关DRG内NF-κB与asic1基因Cp G岛内两个位点的结合均显著增强。（7）鞘内注射NF-κBp65 sh RNA慢病毒能显著抑制PMS成年子代大鼠胃相关DRG内NF-κB和ASIC1的表达,并降低胃特异性神经元的兴奋性;NF-κBp65sh RNA慢病毒还能缓解PMS诱导的成年子代大鼠胃部痛觉高敏。4.结论（1）PMS能诱导成年子代大鼠出现胃部痛觉高敏,并与胃特异性DRG神经元的兴奋性增加和ASICs电流密度增大有关。（2）大鼠胃相关DRG内asic1基因启动子区DNA去甲基化增加,使ASIC1表达上调,参与了PMS成年子代大鼠胃部痛觉高敏。（3）DNMT1和DNMT3b表达下降可能是引起asic1基因启动子DNA去甲基化的原因之一,提示表观调控参与胃部痛觉高敏的发生。（4）转录因子NF-κB通过与asic1基因启动子区结合,上调ASIC1的表达,进而参与PMS成年子代大鼠胃部痛觉高敏。