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水稻是重要的粮食作物,也是单子叶植物分子生物学研究的模式植物。干旱、高盐和低温等非生物逆境胁迫严重影响植物的生长发育和作物高产潜力的发挥。迄今为止,人们已经从不同植物中分离和鉴定了多种胁迫应答相关的基因,这些基因的编码产物可能直接保护植物细胞免受非生物逆境胁迫的伤害,或者通过调控其他基因的表达提高植物对非生物逆境胁迫的耐受性。本实验室前期已经从水稻中克隆了两个与非生物逆境胁迫相关的TFⅢA型锌指蛋白基因ZFP179和ZFP182。本研究在已有研究基础上,进一步研究了ZFP179和ZFP182在提高水稻耐非生物逆境胁迫过程中的作用机理。主要研究结果如下：1、用real-time PCR方法检测了水稻锌指蛋白基因ZFP179在水稻中的表达情况,结果表明ZFP179在成株期水稻根、茎、叶、幼穗和开花期穗等不同组织中均有表达,在幼穗中的表达量最高；NaCl、PEG6000、低温及ABA等处理能提高了水稻幼苗中ZFP179的表达量；利用酵母单杂交体系分析了ZFP179的转录激活活性；用农杆菌介导的转化技术获得了过量表达ZFP179的水稻转基因植株。对T3代转基因水稻幼苗进行了耐逆性鉴定,发现过量表达ZFPl79的转基因植株增强了对盐胁迫的耐受性,对外源ABA的处理表现更加敏感；在盐胁迫处理下,过量表达ZFP179的转基因植株能比野生型植株积累更多的脯氨酸和可溶性糖,能够促进一些胁：迫相关基因如OsDREB2A、OsLea3、OsPSCS和OsProT的上调表达,同时转基因植株也增强了清除活性氧的能力。基于以上研究结果,我们推测在盐胁迫条件下,锌指蛋白ZFP179可能通过了依赖于ABA的信号转导途径促进了渗透性保护物质如脯氨酸、可溶性糖和LEA蛋白等的积累,同时ZFP179也可以通过调控转录因子基因OsDREB2A的表达,进而通过不依赖于ABA的信号转导途径对胁迫相关基因的表达进行调节。2、将非生物逆境胁迫相关的TFIIIA型锌指蛋白基因ZFP182的完整编码序列和两个不同的缺失序列片段分别与酵母GAL4的BD序列融合,采用酵母单杂交体系分析了ZFP182的转录激活活性和转录激活域,结果表明,ZFP182在酵母体内具有转录激活功能,其C端的酸性氨基酸对于其转录激活活性是必需的。进一步通过酵母双杂交实验,以ZFP182N(C端缺失)为诱饵,筛选水稻冷处理的cDNA文库,获得了23个与ZFP182互作的蛋白,包括盐酸脱卤化酶类蛋白、防御反应相关的Dirigent-类蛋白、叶绿素荧光增加蛋白、棉籽糖生物合成蛋白或种子吸胀蛋白(Sipl)、泛素延伸蛋白、RING结构域的C3HC4型锌指蛋白以及核糖体蛋白等。用双分子荧光互补、体外Pull-down技术,对ZFP182与泛素延伸蛋白Z182IP7的互作进行了验证,结果表明ZFP182与Z182IP7蛋白在体外、体内都具有强烈的相互作用。