桃(Prunus persica(L.)Batsch)F基因RAPD标记的克隆及SCAR标记的转化研究

来源 :河北农业大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:yaoyie
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果树的常规育种所需年限长、费用高。近年来,分子标记技术在作物育种中得到迅速发展和应用,但在果树育种中尚处于起步阶段。桃自交亲和性高,单基因控制的质量性状多,遗传机制相对简单,成为果树遗传研究的模式植物。桃的质量性状离核和粘核分别由基因F和f控制,F对f完全显性,它和鲜食及加工品质都有密切的关系,具有重要的经济价值。本研究以桃品种京玉、美味及其杂交后代为材料,通过对F基因RAPD标记的克隆及SCAR标记的转化研究,为桃及其它果树育种亲本的早期选择和重要经济性状的有效利用打下基础。本试验采用CTAB法从桃的幼叶及一年生枝条的韧皮部提取基因组DNA,DNA质量通过电泳和紫外分光光度法检测,全部符合PCR扩增需要。通过调整PCR扩增体系中各组分的浓度,优化了PCR体系,建立了一套适合桃的RAPD反应体系,即在20μl的体积中,DNA用量为20ng,TaqDNA聚合酶IU、dNTPs浓度为0.2mM、Mg2+为2mM,引物为15ng。经PCR扩增获得的特异片断OPI07-1000用玻璃奶法回收后,将其在4℃过夜连接到简易载体pUCm-T上,转化E.coli的DH5 α菌株,蓝白筛选获重组克隆。碱裂解法提取质粒后用Pst I单酶切和PCR扩增两种方法进行验证,酶切与扩增所得谱带大小与回收谱带大小一致。将此谱带测序后得到OPI07-1000的全序列,此片断长度为1054bp,所以OPI07-1000应为OPI07-1054。将在京玉和美味上的克隆片段做同源性比较分析,二者的同源性达100%。据测序结果合成了一对长引物,其长度分别为26bp、25bp并用之对京玉、美味两亲本及其后代作检测,无多态性出现。
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