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戊型肝炎病毒（Hepatitis E Virus，HEV）是戊型肝炎（Hepatitis E，HE）的病原体，主要经粪口途径传播。HEV为单股正链无包膜RNA病毒，基因组长约7.2Kb，包含三个开放编码区，ORF1、ORF2、ORF3，其中ORF2蛋白为病毒衣壳的主要成份，衣壳蛋白与宿主细胞的特异性结合启动HEV的复制过程，是决定HEV对宿主细胞亲嗜性的首要步骤。哺乳动物HEV有4个基因型（1-4型），4种型别之间HEV核苷酸序列的相似性在80%左右，但宿主范围有一定差异，1型和2型HEV只感染人，3型和4型HEV既感染人也感染猪，并且猪是其主要的储存宿主。本课题拟通过对HEV与猪肝蛋白相互作用的研究，筛选并确认与HEV有特异性结合作用的猪肝蛋白，分析这些蛋白在病毒复制过程中的作用，进一步通过比较基因1型、4型HEV与猪肝蛋白结合能力的差异，分析HEV宿主限制性及跨种属感染的机制。我们利用分裂-泛素酵母双杂交系统，分别以基因1型HEV ORF2和基因4型HEVORF2蛋白为诱饵对猪肝脏cDNA文库进行筛选，经过三次文库筛选，运用酵母共转化实验去除酵母双杂交假阳性结果，得到与1型HEV ORF2相互作用的猪肝蛋白9个，与4型HEV ORF2相互作用的猪肝蛋白17个。酵母共转化实验后比较与基因1型和4型HEV ORF2相互作用的蛋白，有9个相同蛋白和8个不同蛋白，8个不同蛋白分别为Yip1家族5（YIPF5）、蛋白转运蛋白Sec61β亚单位（SEC61B）、内质网压力相关蛋白1（SERP1）、Atlastin GTP酶2（ATL2）、细胞色素b5(CYB5A)、趋化素样因子超家族6（CMTM6）、线粒体载体同源物2（MTCH2）、NADP转氢酶（NNT），其中CMTM6蛋白分布在细胞膜上，NNT、MTCH2蛋白分布在线粒体，YIPF5、SEC61B、SERP1、ATL2、CYB5A蛋白分布在内质网。运用化学发光免疫共沉淀的方法进行蛋白相互作用确认实验，酵母共转化实验阳性蛋白与HEV ORF2均存在相互作用，即与1型HEV ORF2相互作用的猪蛋白9个，与4型HEV ORF2相互作用的猪蛋白17个。化学发光免疫共沉淀法定量比较酵母共转化实验阳性猪蛋白与基因1型、4型HEV ORF2相互作用强度差异，YIPF5蛋白和SEC61B蛋白与4型HEV ORF2的相互作用结合强度大于基因1型HEV ORF2，并且这种差异具有统计学意义。这两个蛋白与HEV的宿主差异性是否有关，值得进一步研究。这些发现为进一步研究HEV感染复制和宿主限制性的机制提供了线索和方向。