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一、临床部分:
目的:
通过临床研究旨在观察夏枯草注射液治疗结直肠癌的疗效。
方法:
将110例结直肠癌术后患者依据有无瘤体分为无病灶组和有病灶组,各组分为中药组、中药+化疗组、化疗组。三组分别给予夏枯草注射液、夏枯草注射液+化疗、化疗治疗,均观察42天。观察患者临床症状、生活质量、肿瘤标志物、瘤体变化、VEGF、免疫功能、血常规、肝肾功能等变化。
结果:
无病灶患者中中药组与中药+化疗组在体重、临床症状积分、CD4/CD8方面比较,P<0.01;中药组与化疗组在体重、KPS、临床症状积分、苔腻、CD4/CD8方面,P<0.01,口苦、尿黄、,发热P<0.05;中药+化疗组与化疗组在KPS、临床症状积分、便血、CEA、CD8、NK、CD4/CD8方面比较,P<0.01。
在有病灶患者中,中药组与中药+化疗组比较体重、临床积分、CD8、NK方面比较,P<0.01;中药组与化疗组在KPS、临床积分比较,P<0.01,口苦、尿黄,P<0.05;中药+化疗组与化疗组在体重、KPS、临床积分、瘤体积、CD3、CD4、CD4/CD8、CD8、NK方面比较,P<0.01,口苦、尿黄,P<0.05。
在无病灶和有病灶病人中中药组与中药+化疗组VEGF、CA199治疗后都有下降,但P>0.05。
在无、有病灶患者中中药组、中药+化疗组、化疗组比较肝肾功能、血液常规比较,P>0.05。
结论:
1.夏枯草注射液可明显改善结直肠癌术后患者中医症候表现,提高患者的生活质量,改善肿瘤患者的免疫功能,部分减轻化疗药物的免疫抑制。
2.夏枯草注射液有降低结直肠肿瘤患者CEA表达,并具有一定的抑瘤作用。
3.夏枯草注射液无明显肝肾功能损伤、骨髓抑制作用。
二、实验研究:
目的:
观察夏枯草注射液对于人结肠癌Lst174细胞的体内和体外的抑瘤作用机理。
方法:
一、体内实验:
裸鼠37只盲肠接种Lst174细胞瘤块造模,随机分为空白组、低剂量中药组、高剂量中药组、5-fu组、高剂量中药+5-fu组每组6只,剂量中药+5-fu组7只。中药和生理盐水隔天腹腔注射15次,5-fu处死前5天每天腹腔注射一次。第31天将各组裸鼠称重后处死,取血,瘤体称重,测量大小,脾脏称重,肺转移性肿瘤,肿瘤组织观察VEGF、PD-ECGF、COX-2、MVD以及Bcl-2表达。
二、体外实验:
1.MTT法观察夏枯草注射液10%,20%,40%浓度,5-Fu为20%,PBS为空白组;动物血清观察高、中剂量中药血清组浓度为20%,高、中剂量中药血清10%+5-fu血清10%,20%空白血清组,20%5-fu血清组。连续培养8,16,24h。2.流式细胞仪、RT-PCR法检测夏枯草注射液20%,13.3%,6.67%浓度,5-Fu组为13.3%,小牛血清空白组,13.33%中药+13.33%5-Fu,对细胞凋亡指数、VEGFmRNA、βFGFmRNA影响。
三、LD50试验:
50只小鼠腹腔注射法,剂量为0.01ml,0.14ml,0.2ml,0.29ml,0.4ml。结果:
一、体内实验:
荷瘤裸鼠体内瘤体抑制作用发现,中药组有抑制作用,中药+5-fu组抑制瘤体和瘤重作用好于5-fu组。荷瘤裸鼠体重发现,低剂量中药组体重最重,其余以次为、低剂量中药+5-Fu、空白组、5-FU组、高剂量中药组、高剂量中药+5-Fu组。脾脏重量、脾脏指数比较发现,低剂量中药组优于与其它各组。肺转移计数发现,高、低剂量中药+5-fu组能降低肺转移率,抑制作用较5-fu组好。血清VEGF发现,高低剂量中药组均有降低作用,高剂量中药组含量低于中药+5-fu组以及5-fu组。CEA比较发现,空白组最高,高剂量中药+5-fu组最低,中药组随着中药剂量的增加CEA呈下降趋势。裸鼠肿瘤组织Bcl-2、COX-2、VEGF、PD-ECGF、MVD表达发现,中药组随着中药剂量的增加作用逐渐升高,高、低剂量中药+5-fu组作用优于5-fu组。
二、体外抑瘤实验:
1.细胞抑制率:夏枯草注射液以及药物血清研究发现,高低剂量中药组抑瘤作用和药物的浓度和时间呈正比,24小时各组抑制率均>30%。
2.细胞凋亡:流式细胞仪检测发现夏枯草注射液对细胞有促进凋亡作用,凋亡率和浓度时间有相关性,高浓度中药可能作用在G0-G1细胞生长间隙,中低浓度中药可能作用在G2-M细胞生长间隙。
3.VEGFmRNA、BFGFmRNA表达:VEGFmRNA、BFGFmRNA含量比较显示,在肠癌细胞中有表达,浓度越高则含量越低。
三、LD50:
注射当天0.29ml组,0.4ml组共20只全部死亡,0.2ml死亡5只,其余小鼠继续观察14天。其后14天中小鼠饮食,饮水,活动正常,无死亡,第15天推椎处死小鼠。
结论:
1.夏枯草注射液对于荷瘤裸鼠的瘤体有一定的抑制作用,与化疗药物联合使用能增强对瘤体的抑制作用,降低荷瘤裸鼠血清VEGF、CEA。
2.夏枯草注射液对于结肠癌Lst174细胞VEGFmRNA,BFGFmRNA表达有抑制作用;对于瘤体组织VEGF、COX-2、PD-ECGF的表达均有一定的抑制作用,其多靶点协同作用能够降低MVD表达,故抗肿瘤作用与抑制血管形成等因素有关。夏枯草注射液联合化疗能增强对肿瘤血管的抑制作用。
3.夏枯草注射液有促进人结肠癌Lst174细胞凋亡作用和降低生长率的作用。
4.夏枯草注射液小鼠LD50剂量为7.566ml/Kg。